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[目的]探讨趋化因子CCL19在云锡矿粉诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞转化过程中的作用及机制[方法](1)选用浓度为200μg/ml的云锡矿粉毒染大鼠肺成纤维细胞(RLF-6),每次染毒时间为72小时,隔代染毒至第9代,自第10代起常规传代培养至第40代。取第9代染毒成纤维细胞(F200P9)及正常成纤维细胞(FP9),常规培养72h后换无血清培养基继续培养细胞24h,收集细胞上清,行ELISA检测趋化因子CCL19分泌量。(2)选用浓度为200μg/ml的云锡矿粉毒染的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN),每次染毒时间为72小时,隔代染毒至第9代后常规培养,自第11代起用CCL19及其受体CCR7的特异性中和抗体处理E200组细胞,具体分组如下：E组(Control),E200组,E200(L)组,E200(L-RmAb)组。(3)MTT法检测CCL19对E200细胞增殖的影响并选择作用的最适浓度。(4)倒置相差显微镜观察活细胞的形态。(5)免疫细胞化学法检测成纤维细胞活化标志α-SMA表达及肺泡Ⅱ型上皮细胞CCR7、Ki-67及TGF-β蛋白的表达。经两人双盲法观察,采用半定量积分法判断结果。(6)锚着独立性生长实验及刀豆凝集素实验检测上皮细胞转化。(7)Western blot检测上皮细胞CCR7、Akt、p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白的表达。(8) SPSS17.0统计软件进行数据分析。[结果](1)经200μg/ml云锡矿粉毒染后,成纤维RLF-6细胞胞突变短,CCL19的分泌量大于正常成纤维细胞。(2)MTT结果提示,不同浓度CCL19作用相同时间后,各浓度组细胞与对照组比较,增殖效应升高,对照组与各浓度组之间OD值差异有统计学意义(p<0.05)。在CCL19浓度为0～400ng/ml范围内,随浓度增加,细胞增殖效应增高；药物浓度为200ng/ml时,细胞出现较强的增殖效应,且此浓度与其他高浓度相比,差异无统计学意义(p>0.05)。同一浓度作用12h与作用24h相比,差异无统计学意义(p>0.05),而同一浓度作用12h与48h、24h与48h相比,差异均有统计学意义(p<0.05)。药物作用48h时,各浓度组间差异均无统计学意义(p>0.05)。(3)经200μg/ml云锡矿粉打击后,E200细胞自第35代起出现形态改变,逐渐由多边形转变为多角不规则形,继而转变为短梭形。(4)正常RLF-6细胞中a-SMA表达阴性,经200μg/ml云锡矿粉打击后第25代成纤维细胞出现a-SMA阳性,在第35代时表达较前增强。在不同代数细胞间,第40代细胞Ki-67表达较前增强,增殖指数升高；同代细胞中,其表达强弱表现为E200(L)组>E200(L-RmAb)组>E200组。(5)经矿粉打击后,E200细胞在第40代时出现恶性转化特征,其克隆形成率为(2.333±0.5773)‰,凝集实验阳性。自第11代起用CCL19、CCR7mAb处理E200细胞,E200(L)在第35代即可出现克隆形成,恶性转化时间提前；在第40代时其克隆形成率为(5.3333±1.1547)%o,凝集实验时间仅8min。E200(L-RmAb)组第40代克隆形成率为(1.5000±0.7071)%o,与E200P40组比较差异无统计学意义(p>0.05),凝集实验阳性。而未经染毒者(E组)一直培养至第40代,未出现细胞恶性转化特征。(6)经矿粉打击的上皮细胞表面出现CCR7表达,随细胞培养代数增加,其表达增强。CCL19处理后,E200细胞Akt磷酸化及Bcl-2蛋白表达水平明显升高,而Bax蛋白表达水平降低；同时给予CCR7中和抗体处理时,细胞Akt磷酸化及Bcl-2蛋白表达水平升高及Bax蛋白表达水平降低受抑制。[结论](1)云锡矿粉可以诱导肺成纤维细胞活化及分泌CCL19；(2)云锡矿粉可以诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转化及表达CCR7；(3)趋化因子CCL19可促进云锡矿粉诱导上皮细胞转化,其机制可能与PI3K/Akt通路活化有关。