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脂质体是由磷脂在水中自组装形成的类似生物膜的微小囊泡,具有良好的生物相容性、极高的细胞亲和力、缓释性和靶向性等特质,作为抗肿瘤药物传递系统的应用和研究十分广泛。肿瘤靶向给药是提高肿瘤化疗水平的有效途径之一,为提高化疗药物的肿瘤靶向性,研究者们开发了主动靶向给药系统。有研究显示,以透明质酸(HA)为靶标分子修饰的纳米载体对于靶向CD44受体是有效的。另外,长期应用某种单一的化疗药物容易使肿瘤细胞产生耐药性,从而降低药物疗效,而联合给药方案可根据药物之间不同的抗肿瘤机制发挥协同效应以提高化疗效果和降低毒副作用。本研究以肿瘤细胞表面过表达的CD44受体的特异性配体HA为靶标分子,以丁二胺作为连接臂将小分子胆固醇(Chol)与聚合物HA偶联形成胆固醇-透明质酸轭合物(Chol-HA conjugate),采用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和核磁共振氢谱(1H-NMR)对Chol-HA轭合物的结构进行确证。以盐酸阿霉素(DOX·HCl)和紫杉醇(PTX)为模型药物,采用后插入法将Chol-HA轭合物上胆固醇段嵌入脂质双分子层中,制备同时包载DOX和PTX的HA修饰的主动靶向脂质体(HA-DOX/PTX-Lip)。通过激光纳米粒度仪、透射电子显微镜、荧光分光光度计和高效液相色谱仪对脂质体进行药剂学性质表征。结果表明,HA-DOX/PTX-Lip的平均粒径为(125.5±0.79)nm,表面荷负电约(-9.56±0.62)mV,DOX的包封率为(93.6±0.51)%,PTX的包封率为(70.4±1.46)%。采用咔唑法定量测定HA-DOX/PTX-Lip上HA的含量约占总脂质的9.5%(mol/mol)。以透析法考察脂质体的体外药物释放,结果表明,HA-DOX/PTX-Lip具有明显的缓释效果,并且脂质体中DOX和PTX在pH 5.5 PBS中的累积释放率均高于在pH 7.4 PBS中,显示出酸敏感的释药行为。以溶血实验和体外细胞毒性实验考察Chol-HA轭合物和空白HA脂质体(HA-Lip)的生物相容性,结果显示Chol-HA及HA-Lip对细胞的毒性较低、具有良好的生物相容性;以MTT法考察游离药物与脂质体的体外抗肿瘤活性及双药协同性,结果显示,HA-DOX/PTX-Lip组与其他组(游离药物组,无修饰载药脂质体组)相比,具有较好的体外抗肿瘤效果和明显的协同效应,并且对CD44受体高表达的MCF-7细胞的抑制率高于CD44受体低表达的HepG2细胞,初步验证了 HA的主动靶向性。采用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞术分别定性和定量分析脂质体的体外细胞摄取及摄取机制。其结果显示,在MCF-7细胞内,HA-DOX/PTX-Lip组内DOX荧光强度高于HepG2细胞组,表明HA-DOX/PTX-Lip借助受体-配体介导的内吞作用可以更多的被CD44高表达的MCF-7细胞摄取;摄取机制结果表明HA-DOX/PTX-Lip主要通过网格蛋白介导的内吞、小窝蛋白介导的内吞及受体-配体介导的内吞作用进入MCF-7细胞。综上,HA修饰的共载阿霉素和紫杉醇的主动靶向脂质体具有良好的生物相容性和稳定性,可发挥DOX和PTX的协同抗肿瘤作用,可能是提高肿瘤治疗效果的有效靶向载体。