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目的:探讨不同时间点电针对小鼠视交叉上核SCN内谷氨酸信号通路蛋白磷酸化修饰水平的影响机制。方法:将108只雄性Barb/c小鼠放入实验室独立单元隔间内进行驯化,设置Clock Lab系统软件模拟光-暗交替环境(Light-Dark cycle,LD)12:12,驯化10天,通过Clock Lab系统记录其行为学数据。待到小鼠自发活动节律与光-暗周期同步后,将灯光设置为恒定黑暗(Dark-Dark,DD),记录自由运行小鼠昼夜转轮产生的相位转移值,随机分为CT0组、CT4组、CT8组、CT12组、CT16组、CT20组,每个时间点又分为电针组、假穴组、空白对照组。据小鼠驯化时的起始活动时间预测处理当日的CT12,以此推测各时间组电针针刺时间,电针组在相应时间电针小鼠百会穴、长强穴,两经穴旁分别各用针灸针透皮浅刺一针为辅助针。电针参数设置为:疏密波、电针频率2/15 Hz,电流0.5 m A,共针刺15分钟;假穴组小鼠在相应时间点电针右侧胁下非经非穴点,辅助针及电针刺激参数同上;空白组不做其他任何处理。在所有动物针刺处理2小时后,用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,手术取出包括SCN区域的脑组织,即刻放置入-80°液氮中,每组以同样的方式于相应时间点采集108个样本,运用TMT标记、肽段富集及基于质谱的蛋白磷酸化修饰定量组学分析SCN全蛋白的磷酸化修饰水平。结果:(1)本次实验共鉴定到3078个蛋白上的11232个磷酸化位点,其中2651个蛋白上的7633个位点具有定量信息。每个时间组内小鼠SCN蛋白磷酸化修饰水平具有差异趋势,在CT0时间点,电针组与空白组比较磷酸化修饰表达以上调为主,电针组与假穴组比较,表达以上调为主;在CT4时间点,电针组与空白组比较表达以上调为主,电针组与假穴组比较,表达以下调为主;CT8时间点,电针组与空白组比较,电针组与假穴组比较,修饰水平均以下调为主;CT12、CT16、CT20时间点,电针组与空白组、电针组与假穴组比较,修饰水平均表现以上调为主。(2)对6个时间点差异修饰位点对应蛋白显著富集的KEGG通路分析后发现,谷氨酸(Glu)信号通路具有较高的差异值,其不同时间点显著性不同,表现为CT0、CT4、CT8时间点通路富集显著,CT12、CT16、CT20通路富集变化不明显。(3)在CT4、CT8、CT0时间点,Glu信号通路蛋白磷酸化存在共同上调的蛋白钙离子通道蛋白VGCC和SHANK蛋白。通过分析差异修饰蛋白位点氨基酸序列发现,钙离子通道蛋白VGCC对应的基因为Cacna1a,SHANK蛋白的基因为Shank3,不同时间点电针后VGCC蛋白在394对应位点和SHANK蛋白2200、2202、2303对应位点上下游氨基酸序列呈现出差异性分布。结论:(1)不同时间点电针对小鼠SCN内Glu信号通路蛋白磷酸化修饰的作用不同,可能是针刺信号调节昼夜节律的内在机制。(2)CT4、CT8产生的蛋白磷酸化修饰上调,可能与针刺信号调节Glu信号通路上钙离子通道蛋白VGCC对应位点2200、2202、2303和SHANK蛋白对应位点394上下游氨基酸序列有关。