传染性法氏囊病毒细胞活疫苗临床前期研究

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传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种急性、高度接触传染的免疫抑制性疾病。IBDV主要侵害鸡体的中枢免疫器官—法氏囊,从而增加对其它病原的易感性,严重危害着世界各地养禽业。目前,对该病的控制主要以疫苗免疫为主,但由于最近变异毒株的不断出现,使得经典疫苗不能对该病产生有效的防护作用。因此,开发一种具有良好免疫原性的新疫苗,显得尤为重要。本课题就IBDV NB株疫苗的免疫原性进行研究。将IBDV-NB囊毒和细胞弱毒进行标定,结果显示:IBDV-NB-F7代囊毒的BID50/0.1ml为106.15,对鸡的最小发病剂量为10BID50/0.1ml, IBDV-NB-F7代囊毒无外源病毒和细菌污染。IBDV-NB细胞弱毒F26-38代的毒价为106.243~6.876TCID50/0.1ml,免疫雏鸡后未产生对ND-Lasota疫苗免疫抑制作用(P>0.05)。5×104TCID50/0.1ml免疫接种后未造成法氏囊的显微损伤。IBDV-NB-F38代的转瓶生产最佳工艺为:最佳CEF接种浓度为2×106/ml,最佳接毒剂量为5000倍稀释,最佳收毒时间为120h。一次免疫NB-F38细胞活疫苗株后7天对NB-F7强毒和BC6/85毒株可分别产生50%和25%的保护率,一免后10天可分别产生94.7%和90%的保护率。与商用228E疫苗相比,NB-F38对NB-F7的保护率高于228E、对BC6/85的保护率上与228E相近。二免NB-F38疫苗7天对NB-F7强毒的保护率能达到100%,对BC6/85的保护率为90%。NB-F38疫苗的免疫保护期测定显示,二免后88天能产生对NB-F7 90%的保护率。NB-F38疫苗ELISA抗体检测显示,二免后7天抗体滴度迅速升高,10天达到高峰并持续至免疫后60天。NB-F38疫苗的VP3、VP4抗体检测显示,一免血清中的VP3、VP4抗体以及二免血清中的VP4抗体全部为阴性:二免后7天VP3抗体达到高峰、14天时下降到阳性水平并持续至免疫后60天。NB-F38疫苗免疫后的中和抗体(NA)检测显示,一免后30天达到高峰,之后迅速开始下降,到60天时消失;二免后14天达到高峰,之后逐渐下降,二免后60天还能维持较高的水平。NB-F38疫苗NA与免疫保护力的关系分析显示,NA滴度为869.14可产生对NB-F7的保护作用,但对BC6/85至少NA滴度为1422.33时才能产生保护作用。综合上述,表明,NB-F38疫苗具有优良的免疫保护力。
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