目的通过研究针刺对高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6小鼠胰岛素抵抗状态和肝脏中NLRP3炎症小体活化及其下游白细胞介素1(IL-1β)等炎症因子的表达水平的影响,为临床针刺调节肥胖及胰岛素抵抗提供实验依据,并探讨针刺调节胰岛素抵抗的作用机理。方法将50只雄性C57BL/6小鼠随机抽取10只做为正常组,其余40只给予持续高脂饮食16周。分别在0周、4周、8周、12周、16周、20周、24周记录小鼠体重。在第16周结束时,检测小鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),并计算其胰岛素敏感性指数(ISI)。与正常组比较,当模型组小鼠ISI比正常组明显降低(P<0.05),视为造模成功。将造模成功的小鼠随机分为3组,分别为模型组、非穴位组、穴位组,每组各10只小鼠,继续给予持续高脂饮食喂养8周,同时正常组继续给予普通饲料喂养8周。穴位组和非穴位组从第17周开始针刺治疗,每日一次,每次10min,连续治疗8周。穴位组选取小鼠“关元”、双侧“足三里”、双侧“胰俞”穴进行针刺。非穴位组选取尾部非穴位(取小鼠尾部距尾跟部0.5cm和1cm各一点)针刺。末次治疗后第二天检测各组小鼠空腹血糖并进行腹腔糖耐量试验(IPGTT),比较各组小鼠糖耐量。末次治疗后第四天进行胰岛素耐量试验(ITT),比较各组小鼠胰岛素耐量。末次治疗后第五天取材:取血清用自动生化分析仪检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)和甘油三脂(TG);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清中瘦素(Leptin)、胰岛素(Insulin)的分泌情况;用HE染色法观察各组小鼠肝脏和脂肪组织的形态学变化;免疫印迹实验(WB)检测各组小鼠肝脏中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)及其剪切体(p20)、白介素1前体(pro-il-1β)及白介素1(il-1β)的表达;免疫组化法(ih)检测肝脏中nlrp3、asc、p20及il-1β的表达情况。结果1.造模结果:持续高脂饲料喂养的小鼠与持续普通饲料喂养的小鼠相比,16周后体重明显上升(p<0.05),胰岛素敏感性指数明显降低(p<0.05)。2.itt和ipgtt结果显示:模型组与正常组相比,血糖水平明显上升(p<0.05),糖耐量和胰岛素耐量均表现异常;穴位组与模型组相比,血糖水平降低(p<0.05),糖耐量和胰岛素耐量有所改善;非穴位组与模型组相比,血糖水平降低不明显,糖耐量和胰岛素耐量改善较小。3.生化结果显示:与正常组比较,模型组tg、tc明显上升(p<0.05);与模型组比较,穴位组tg、tc明显下降(p<0.05),非穴位组tg、tc下降不明显。4.elisa结果显示:与正常组比较,模型组血清瘦素水平和胰岛素水平明显上升(p<0.05);与模型组比较,穴位组血清瘦素水平和胰岛素水平明显下降(p<0.05),非穴位组血清瘦素和胰岛素下降不明显(p>0.05)。5.he染色结果显示:正常组脂肪组织呈蜂窝状结构,由大量单泡脂肪细胞构成,脂肪细胞呈多边形或圆形,呈空泡状;模型组脂肪细胞明显增大且脂肪细胞大小不规则,细胞间隙变大;穴位组脂肪细胞变小,细胞间隙变小;非穴位组脂肪细胞大小及细胞间隙变化不明显。正常组肝细胞排列紧密,没有明显的肝脏脂肪变性;模型组肝脏排列疏松,包浆内有大小不一的脂滴,穴位组肝脏脂肪变性明显减少,肝细胞的损伤程度与模型组相比有所改善;非穴位组肝脏细胞仍然排列较为疏松,包浆内存在大小不一的脂滴。6.wb结果显示:与正常组比较,模型组肝脏nlrp3、asc、p20及il-1β的表达明显上升(p<0.05);与模型组比较,穴位组肝脏nlrp3、asc、p20及il-1β的表达明显降低(p<0.05),非穴位组肝脏NLRP3、ASC、p20及IL-1β的变化无显著性差异(P>0.05)。7.IH结果显示:模型组与正常组比较,肝脏NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表达明显上升;与模型组比较,穴位组肝脏NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表达明显降低,非穴位组肝脏NLRP3、ASC、p20及IL-1β的变化无显著性差异。结论1.连续16周高脂饮食喂养C57BL/6小鼠可成功诱导小鼠胰岛素抵抗模型。2.针刺可降低高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6小鼠的体重、血糖、TG、TC、Leptin、Insulin水平,改善胰岛素抵抗模型小鼠胰岛素耐量及糖耐量,达到对肥胖和胰岛素抵抗的良性调节作用。3.针刺能降低高脂饮食诱导的肥胖C57BL/6小鼠肝脏中的NLRP3、ASC、p20及IL-1β的表达水平,推断通过靶向NLRP3炎症小体改善胰岛素抵抗。4.实验结果证实“标本配穴”针刺法对肥胖小鼠的胰岛素抵抗状态有一定的调节作用,同时通过对穴位和非穴位的针刺得出针刺穴位和非穴位有显著性差异,为今后在临床上运用针刺穴位治疗内分泌方面的疾病提供可靠的实验依据。