DisA(DNA integrity scanning proteinA)是DNA损伤修复蛋白,它能够发现机体的DNA损伤,并且来进行修复,从而保持DNA的完整性。研究发现,它具有二腺嘌呤环化酶(diadenylate cyclase,DAC)活性,能够催化两个ATP生成环二腺嘌呤核苷酸c-di-AMP,c-di-AMP是细菌的第二信使,不但与细胞形态的调控和细胞壁的合成有密切的关系,还与病原菌的致病性和细菌的耐药性有关。为了得到可溶性的DisA,从而为合成c-di-AMP、研究c-di-AMP的功能和调控机制奠定基础,本研究通过PCR的方法扩增DisA基因,通过非酶连接的方法将其连接到十种带不同可溶性标签的丙酸诱导型表达载体上,通过菌液PCR、酶切和测序来鉴定重组质粒,十种重组质粒用丙酸钠进行诱导,将诱导后有表达的重组质粒挑取出来进行大量诱导表达,然后破碎取上清,用SDS-PAGE电泳和Western blotting来检测上清中目的蛋白表达情况。结果表明,成功克隆出了DisA基因,用非酶连接的方法将其克隆到十种丙酸诱导型表达载体上,经菌液PCR、酶切和测序鉴定,证明十种重组质粒构建成功。用丙酸钠进行诱导表达,发现共有六种重组质粒在菌体蛋白中检测到了目的蛋白的表达,携带的标签分别是:6×His-Grifin-TEV-LIC、6×His-MBP-TEV-LIC、6×His-NusA-TEV-LIC、6 ×His-SUMO-TEV-LIC、6×His-Thioredoxin-TEV-LIC、6×His-γ-crystallin-TEV-LIC,将这六种重组质粒大量诱导表达的菌体采用超声波进行破碎处理,然后取上清进行SDS-PAGE电泳和Western blotting检测,发现目的蛋白在上清中均有表达,证明得到了可溶性的DisA。