ISKNV五个环指蛋白的表达分析及相互作用蛋白的筛选

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传染性脾肾坏死病毒(InfectiousSpleenandKidneyNecrosisVirus,ISKNV)是一种虹彩病毒,近年在广东地区流行,导致养殖鳜鱼(Sinipercachuatsi)大量死亡。根据生物信息学分析,ISKNV基因组中含有五个开放读码框(OpenReadingFrame,ORF)编码环指蛋白(RINGfingerprotein),包括ORF12,ORF65,ORF66,ORF99和ORF111,其中ORF12蛋白与不同来源的核蛋白Makorin很相似;ORF65蛋白和ORF66蛋白预测在过氧化物酶体的膜上相互作用;ORF111蛋白与不同来源的TRAF有极高的相似性。为了准确掌握这五个环指蛋白基因的表达情况,将健康鳜鱼进行人工感染ISKNV后,分别在9个时间点解剖感染的鳜鱼获取脾脏组织,并用半定量RT-PCR方法对这五个基因的表达水平进行研究,其中以18srRNA作为内对照。利用MBP-pulldown技术从FHM细胞中筛选与探针蛋白MBP-66及MBP-111相互作用的靶蛋白。用MBP-66为探针蛋白调出来的靶蛋白大小约为35.1kDa;用MBP-111为探针蛋白调出的两个靶蛋白一个大小约为33.9kDa,另一个约是31.9kDa。
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