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研究背景缺血性心脏病：即由于冠脉循环改变引起的冠脉血流和心肌需求之间不平衡导致的心肌损害,它的发病率和死亡率逐年增高,而且日趋年轻化，成为严重威胁人类健康的疾病。PTCA（经皮冠状动脉成形术）、CABG (冠脉搭桥手术)等治疗方法取得了满意效果,但是一部分患者冠状动脉纤细或病变弥漫,并不适合CABG或PTCA,而且存在费用高、手术复杂及术后再狭窄等问题。Hockel等于1993年提出治疗性血管新生的概念它指的是通过药物基因或其他方法促进缺血组织血管新生，在原有微血管的基础上长出新的毛细血管，与原有血管网相融合交汇，改善组织供血，提高心肌代偿能力的一种方法。中药对血管新生有一定的作用。以中医理论气血相关学说为基础，结合多年的临床实践建立起来的“芪丹通脉片”是治疗缺血性心脏病的有效方剂，既往研究发现本药有防治冠心病心肌缺血的作用，预防性给予芪丹通脉片可提高心肌缺血大鼠心室内血管内皮生长碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达[1][2].为了明确该药在促进血管新生及改善心功能方面的作用,本研究通过芪丹通脉片含药血清作用于CAM.，在解剖显微镜下计数血管；采用流式细胞仪分析脐脐静脉内皮细胞细胞周期；采用免疫组化分析脐静脉内皮细细胞VEGF蛋白的表达。以从组织和细胞的层面探讨益气活血中药的促血管生成作用机制，主要结果报告如下。一、芪丹通脉片含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响目的：将芪丹通脉片含药血清滴加到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上，观察其对血管新生的影响。方法：8只SD大鼠，随机分为2组，每组4只。药物组每天每只大鼠按体重灌胃给予芪丹通脉片高剂量浸膏干粉混悬3.24g/(kg·d)，一日2次，每次2ml，正常血清组的大鼠按照正常食物、饮水饲养,7d后腹主动脉取血，离心处理后，取血清将其置于-20℃冰箱中冻存取7日龄龄鸡胚，随机分组，每组10枚，用解剖刀启开约直径约1cm的窗口，暴露CAM，无菌胶带封口继续孵化。隔日，取定性滤纸作为载体置于CAM上，分别滴加含药血清正常血清40uL于载体上，对照组分别滴加40uL生理盐水(NS)和bFGF，密封后继续孵育72h，以甲醇和丙酮混合液(1：1)在室温下固定，以载体为中心剪下CAM，展载体于滤纸上，[3-5]在解剖显微镜下以相同放大倍数计数血管，以实验部位边缘lmm范围内为一级血管，以实验部位边缘5mm处为二级血管进行观察分析，比较各组血管生成数目，所有数据以均数土标淮差表示应用SPSS统计软件进行单因素方差分析比较各组间差异。结果：解剖显微镜下计数新生血管数目。芪丹通脉片有明显的促进CAM血管新生作用,药物组一级血管数29.17±2.99，二级血管数37.83±2.71与NS组比较有统计学意义(P<0.05),但与bFGF组比较,促CAM血管新生作用相对较弱(P<0.05)。结论：芪丹通脉片有明显的促进CAM血管新生作用，其有效改善缺血心肌的血供以及治疗缺血性疾病方面可能与其促进血管新生有关。二、芪丹通脉片含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF表达的影响目的：在DMEM培养基中加入芪丹通脉片含药血清作为培养液，培养脐静脉内皮细胞应用免疫组化分析VEGF的表达。方法：制备含药血清10只SD大鼠，随机分为2组，随机分为药物组和生理盐水组给药剂量处理方法同实验一将HUVEC随机分为3组：含药血清组，正常血清组，阴性对照组,分别于DMEM培养液中加入,含药血清，正常血清，阴性对照组,采用等量PBS加入培养基中作为对照将内皮细胞接种于24孔培养板每组4空加入0.82cm的盖玻片。培养细胞至融合后按不同分组给药,再孵育24h后取出盖玻片按试剂盒的免疫细胞化学SABC法检测VEGF表达。结果：显微镜下,细胞胞核及细胞质具有棕褐黄色颗粒者为阳性细胞，对比正常血清组含药血清组细胞边界和核结构清晰细胞核颜色深染，含药血清＋阻滞剂组以及阴性对照组VEGF仅有微弱表达。结论：芪丹通脉片能够明显促进VEGF表达,提示该药物可能通过促进VEGF表达而起到促进缺血心肌的血管新生。三、芪丹通脉片含药血清对脐静脉内皮细胞增殖的影响目的：在DMEM培养基中加入芪丹通脉片含药血清作为培养液，培养脐静脉内皮细胞，观察其对细胞增殖影响。方法：制备含药血清10只SD大鼠，随机分为2组，随机分为药物组和生理盐水组给药剂量处理方法同实验一将HUVEC分为3组：含药血清组，正常血清组，含药血清＋阻滞剂组,分别加入各组的培养液，终浓度为150ML/L应用流式细胞术检测各组细胞周期,所有数据以均数土标淮差表示应用SPSS统计软件进行单因素方差分析比较各组间差异。结果：正常血清培养的HUVEC周期中G0/G1，期、S期及G2-M期细胞分布比例正常。含药血清组G0/G1期细胞数显著减少(P<0.05)，S期细胞数显著增多(P<0.05)含药血清＋阻滞剂组较含药血清组比较G0 /G1期细胞数增加(P<0.05)，S期细胞数有所减少，(P<0.05)结论：芪丹通脉片含药血血清作用于内皮细胞周期各时相的细胞数占细胞总数的百分比与对照组比较有明显的不同。S期细胞显著增多,而G0/G1期细胞相对减少,而在加入范得它尼后流式细胞术分析其周期发现与含药血清组对比G0/G1期细胞数增加，S期细胞数较含药血清组明显减少，(P<0.05)说明QTPMT是促进了VEGF的表达从而促进了细胞的增殖。