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目的：采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术构建全人源的鼻咽癌抗独特型抗体库，从噬菌体抗体库中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β型抗独特型噬菌体单链抗体（Ab2β scFv）或小分子抗体片段，并对鼻咽癌的噬菌体抗独特型抗体进行初步鉴定和测序分析。 方法和结果：从10例鼻咽癌病人外周血分离PBMC，用抗鼻咽癌单抗FC2（Abl）体外致敏，EBV转化致敏的PBMC，经夹心法ELISA检测，其中8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经3次PCR，扩增出5种VH（γ、μ）和7种VL（κ、λ）基因，经连接组成14种scFv基因。酶切scFv基因后与载体fUSE5连接，电导入大肠杆菌MC1061。经四环素抗性筛选，得到库容为1.5×108的初级噬菌体抗独特型抗体库，噬菌体DNA中全长scFv基因的插入率为70％。用纯化的抗鼻咽癌单抗FC2对噬菌体抗体库进行4轮筛选富集后，从中随机挑取270个克隆进行ELISA筛选，得到91个Ab2 scfr单克隆，阳性率为33.7％。对筛选出的91个阳性克隆进行结合抑制ELISA分析。结果发现有15个克隆在原浓度时能抑制FC2单抗与鼻咽癌细胞的结合，抑制率在48.47％±9.30左右。且有5个克隆的A405值随稀释倍数的增加而上升，抑制百分率也逐渐下降，呈剂量依赖关系，表明这5个克隆呈现的抗独特型scFv可能为β型。对这5个阳性克隆进行测序分析，结果表明：G22 scFv全长720bp，V、D、J分别属于VH4-39-D4-11-JH3-linker-V1-19-JL2，GenBank序号为AB019439和D87018；E92scFv全长720bp，其基因与G22 scfr的基因完全一致；150scfr全长222bp，V、D、J分别属于VH4-4-D4-11-JH6，GenBank序号为AB019441；D83 scFv全长228bp，其基因与150 scFv的基因完全一致；154 scFv全长222bp，V、D、J分别属于VH4-31-D4-11-JH6，GenBank序号为AB019439。 一 结论：应用体外致敏法和 EBV转化联合噬菌体抗体库技术，构 建了全人源鼻咽癌抗独特型抗体库，并从中筛选出鼻咽癌的噬菌体抗 独特型抗体，通过结合抑制ELISA及序列测定分析，所获得的噬菌体 抗独特型抗体具有竞争性抑制抗鼻咽癌单抗＊ 与鼻咽癌细胞结合 的能力，表明其能模拟鼻咽癌细胞抗原。这为进一步获得可溶性的鼻 咽癌抗独特型抗体，制备抗鼻咽癌的肿瘤疫苗奠定了坚实的基础。