阴地蕨（Botrychium ternatum（Thunb.）Sw.）为阴地蕨科阴地蕨属植物,以全草入药,其资源丰富,分布广泛,具有清热解毒、平肝熄风、止咳、止血、明目去翳等功效,为民间常用的中草药与民族药。1977年版《中国药典》中曾经收载了阴地蕨,鉴别项仅有性状鉴别和显微鉴别,无含量测定及其它检查项,现行2015版《中国药典》中未收载该药材,为能够全面准确的控制阴地蕨药材的内在质量,为阴地蕨药材的生产和质量控制标准规范奠定基础,有必要对其质量标准进行深入系统的研究。另外,前期中外植物化学工作者已从阴地蕨属植物中分离出黄酮类、多糖类等多种化学成分。其中黄酮类化合物主要有阴地蕨素、木犀草素、槲皮素、山奈酚等,这些成分均具有不同程度的抗氧化,祛痰、抗炎或抗肿瘤活性,是共同的活性指标成分,前期对阴地蕨黄酮类成分的药理研究主要集中在祛痰、抗炎和抗肿瘤上,为了科学、充分利用阴地蕨中的黄酮资源,因此本研究对阴地蕨的总黄酮进行提取分离纯化,并考察阴地蕨总黄酮的体外抗氧化活性和体内对氧化损伤的保护作用,为开发治疗以抗氧化机制为病基的疾病以及成方制剂提供依据。目的:制定阴地蕨药材质量标准,优化阴地蕨总黄酮提取工艺,在提取工艺的基础上分离纯化其总黄酮,并以纯化后的总黄酮进行体外抗氧化活性测定和体内对氧化损伤的保护作用研究。方法:首先,通过文献考证及系统的生药鉴定研究确定阴地蕨药材的来源,观察阴地蕨药材的性状和显微鉴别特征;选择木犀草素为对照品进行TLC色谱定性研究;分别采用紫外可见分光光度法和高效液相色谱法建立阴地蕨药材的含量测定方法;并检查其水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物。然后,我们在单因素试验的基础上,选取具有显著效应的乙醇体积分数、提取时间和液固比三个因素作为影响因子,应用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,以总黄酮提取率为响应值,进行响应面分析,得出阴地蕨总黄酮的最佳提取工艺,并在此条件下进行验证试验,确定最佳提取工艺。其次,采用80%乙醇回流提取,石油醚脱脂,大孔树脂吸附,不同浓度乙醇洗脱,得到纯化的阴地蕨总黄酮,再以纯化后的阴地蕨总黄酮为研究对象,以维生素C（Vc）和芦丁为对照,探讨其总抗氧化能力及对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基（·DPPH）、·ABTS⁺自由基、羟基自由基（·OH）的清除能力的影响,从而确定阴地蕨总黄酮的体外抗氧化活性。最后,以维生素E（VE）为对照,采用四氯化碳（CCl₄）氧化损伤小鼠模型测定阴地蕨总黄酮对CCl₄所致氧化损伤小鼠中肝、肾组织中的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力,还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量的影响,从而确定阴地蕨总黄酮的抗氧化损伤作用。结果:（1）TLC采用硅胶G板,以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（20︰10︰3︰1.5）为展开剂,1%FeCl₃乙醇溶液为显色剂,可见清晰的斑点;紫外分光光度法以芦丁为对照品,以总黄酮含量为指标,经对8批药材测定,药材中阴地蕨总黄酮含量不低于15.69mg·g^-1;HPLC法以槲皮素和山奈酚为对照品,以甲醇-水（含0.4%磷酸）为流动相,检测波长366nm,经对8批药材测定,药材中槲皮素的含量不低于1.30mg·g^-1、山奈酚的含量不低于1.25 mg·g^-1;（2）阴地蕨总黄酮最佳提取工艺为80%乙醇提取56 min,液固比12.5:1。总黄酮提取率预测值为1.628%,实际值为1.609%,相对误差为0.32%;纯化后的阴地蕨总黄酮纯度为36.73%;（3）当阴地蕨总黄酮的质量浓度达到0.8mg·ml^-1的时候,其对·DPPH自由基的清除能力达到了92.9%,接近Vc的水平;在质量浓度为0.6mg·ml^-1时,Vc对·ABTS⁺的清除率达到42.7%,阴地蕨总黄酮对·ABTS⁺的清除率达到41.8%,而芦丁对·ABTS⁺的清除率只有12.0%;阴地蕨总黄酮浓度为1.0mg·ml^-1的时候,其对·OH自由基的清除能力达到了68.2%,接近Vc的水平;相同浓度下阴地蕨总黄酮的还原能力明显低于Vc的抗氧化能力,但又显著高于芦丁的抗氧化能力;（4）与模型组对比,阴地蕨总黄酮各剂量组小鼠的MDA均有不同程度的下降,SOD活力、CAT活力、GSH含量均有不同程度提高,且总黄酮各剂量组与之差异具有统计学意义（P<0.01）。结论:（1）阴地蕨药材的显微、TLC鉴别、总黄酮及槲皮素、山奈酚的含量测定方法准确可靠,可有效控制阴地蕨药材的质量。（2）阴地蕨总黄酮提取的优选工艺稳定可行、操作简单。（3）阴地蕨总黄酮具有明显的抗氧化活性。