大豆作为一种营养成分较为全面的食品原料,具有广阔的发展前景。7S大豆球蛋白作为大豆蛋白中的重要组分,其结构域的理化性质会作用于大豆蛋白的功能特性,进而影响大豆制品的产品品质。因此,从分子层面对7S大豆球蛋白进行探究有助于对大豆及其制品的生产实践和理论研究进行突破。目前已有研究者发现糖基和延展区对7S大豆球蛋白功能特性的发挥有着重要的影响,然而与此相关的研究并不全面。本研究制备延展区及N-连接糖基缺失的重组7S大豆球蛋白亚基有助于研究不同结构域对7S球蛋白功能特性的影响,为重组大豆蛋白水分散体系的构建打下了基础。本文所得结果如下:以山东省农科院的齐黄34大豆品种作为原料提取大豆的总RNA,经过反转录构建其c DNA单链,根据NCBI官网查询到的α-亚基核心区序列（GB编号为NM＿001249927.2）设计引物F1/R1,通过RT-PCR扩增获得目的基因α-亚基核心区,得到的片段长度在1300 bp左右,与理论值相符;然后与载体p GEM-T Easy相连接,导入到感受态细胞E.coli DH 5α中,经蓝白斑筛选、菌落PCR、Eco RⅠ/XhoⅠ双酶切及序列测定比对筛选得到正确的重组克隆载体,命名为p GEM-α_c。将重组克隆载体与质粒p ET-28a分别双酶切后相连接,导入到感受态细胞E.coli BL21（DE3）中,经双酶切、菌落PCR及序列测定比对筛选得到正确的重组表达载体,命名为p GEM-28a-α_c;将阳性工程菌p GEM-28a-α_c-BL21培养至菌液OD600为0.8时,使用0.2 mmol/L的诱导剂IPTG在37℃下继续培养9 h可以得到表达量较高的分子量大约在50 k Da的重组α-亚基核心区目的蛋白。采用振幅25,6 s/4 s,30 min的条件超声4-5个循环破碎菌体,在4℃的环境中8500 r/min离心45 min并回收上清液作为粗蛋白液。将收集的上清液应用蛋白纯化系统采用镍离子亲和层析柱进行纯化,平衡液与洗脱液均使用1 m L/min的流速,先通过浓度为20%的洗脱液对大部分杂蛋白进行洗脱,再使用浓度为80%的洗脱液对目的蛋白进行洗脱,最终获得的重组α-亚基核心区纯度能够达到87%以上。