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背景:近年来的研究证实,在高血压、冠心病等心血管疾病发生与发展的不同阶段,炎症是一个主要的、共同的病理生理学特征。心血管疾病往往是一种以血管内皮细胞损伤、单核/巨噬细胞浸润为特征的慢性炎症反应性疾病。因此控制炎症可能是当今治疗这些疾病的有前途的方法之一。目前研究表明,瞬时受体电位香草醛亚型1受体(TRPV1)能够抑制炎症,在炎症状态下对机体有保护作用。中药吴茱萸作为治疗心血管疾病的常用中药已有一定历史,多方面的研究结果提示其有效成分吴茱萸(EVO)可能为 T R P V1受体激动剂。因此,进一步揭示 T RV1受体在炎症中的作用,探讨 TRPV1受体对 M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用,对心血管疾病等慢性炎症反应性疾病的治疗具有重要的临床意义。 目的:本实验在人单核细胞白血病细胞(THP-1)培养模型上,利用白介素-4(IL-4)诱导 THP-1分化为 M2型巨噬细胞,通过观察 TRPV1受体对 M2型巨噬细胞表型相关指标的影响,以及吴茱萸碱对该过程的影响作用,从而阐明TRPV1受体对 M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用,为进一步揭示 T RP V1受体及吴茱萸碱的抗炎作用奠定基础。 方法: 1.实验分组及干预:将对数生长期的THP-1以3×105个/孔密度铺细胞于6孔板,以2ml RPMI1640+10%FBS培养基培养。待细胞长至80%以上开始进行分组加药刺激,具体分组如下: 1)Vehicle组:加入 vehicle使其终浓度为1/2000; 2)IL-4组:加入 IL-4使其终浓度为10ng/ml; 3)CAP+IL-4组:分别加入Capsaicin和IL-4使其终浓度分别10umol/L和10ng/ml; 4)CAPZ+CAP+IL-4组:分别加入 Capsazepin、Capsaicin和IL-4使其终浓度分别为10umol/L、10umol/L和10ng/ml; 5)EVO+IL-4组:分别加入 EVO和IL-4使其终浓度分别为10umo l/L和10ng/ml; 6)CAPZ+EVO+ IL-4组:分别加入 Capsazepin、EVO和IL-4使其终浓度分别为10umol/L、10umol/L和10ng/ml; 各组细胞在37℃5%C02条件下培养12 h。培养处理后,取上清液及细胞成分,进行相关指标测定。 2.观察指标 1)酶联免疫吸附试验(E LIS A)检测 T GF-β1的产生; 2)RT-PCR检测细胞目的基因 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达; 3) Western blot检测 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达。 结果: 1.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测 TGF-β1的产生:与 Vehic le组相比,经 IL-4诱导的M2型巨噬细胞,其细胞因子 TGF-β1的产生明显增加,利用 C AP特异性激活 TRP V1受体后能明显降低 TGF-β1的产生,且该作用可被 TRPV1受体拮抗剂CAPZ部分拮抗。 2. RT-PCR检测细胞目的基因 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达:与 Ve hic le组相比,经 I L-4诱导的M2型巨噬细胞,其表面特定标志分子 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达明显增加,利用 CAP特异性激活 TRPV1受体后能明显降低 Arginase-1、Mannose Receptor mRNA的表达水平,且该抑制作用可被 TRPV1受体拮抗剂 CAPZ所拮抗。 3. Western blot检测 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达:与 Ve hic le组相比,经 I L-4诱导的M2型巨噬细胞,其表面特定标志分子 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达明显增加,利用 CAP特异性激活 TRPV1受体后能明显降低 Arginase-1、Mannose Receptor蛋白的表达水平,且该抑制作用可被 TRPV1受体拮抗剂 CAPZ所拮抗。 4.通过吴茱萸碱干预后可明显降低 I L-4所诱导的M2型巨噬细胞的功能,其主要表现为 TGF-β1产生下降、Arginase-1、Mannose Receptor mRNA和蛋白表达水平下降,并且该抑制作用可被 TRPV1受体拮抗剂 CAPZ所拮抗。 结论: 1.在 THP-1细胞培养模型上,激活 TRPV1受体后能明显降低 IL-4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达,且该作用可被 T RP V1受体拮抗剂所阻断,提示 T RP V1受体可调控 M2型巨噬细胞的功能。 2.在 THP-1细胞培养模型上,吴茱萸碱能明显降低 I L-4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达,且该作用可被 TRP V1受体拮抗剂所阻断,提示吴茱萸碱可能通过激活 T RP V1受体调控 M2型巨噬细胞的功能。