【摘 要】
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DNA加合物是致癌物或其代谢产物与DNA分子的亲核位点形成的共价结合物,是一种重要的暴露标志物.DNA加合物的形成代表着化学致癌过程中的一个早期的、可检测的关键阶段.目前DN
【出 处】
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同济医科大学 华中科技大学同济医学院 华中科技大学
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DNA加合物是致癌物或其代谢产物与DNA分子的亲核位点形成的共价结合物,是一种重要的暴露标志物.DNA加合物的形成代表着化学致癌过程中的一个早期的、可检测的关键阶段.目前DNA加合物的检测方法主要有:免疫法、荧光法和<32>P-后标记法已及各种色谱方法等,其中<32>P-后标记法由于具有极高的灵敏度(1个加合物/10<8-10>正常核酸),从而成为目前测定DNA加合物的最主要方法.但<32>P-后标记法及其改进法仍然存在许多难以克服的缺点,如放射自显影中经常存在人为干扰斑点,操作步骤繁琐,放射性同位素对人体有害,而且检测费用较高.此外方法的特异性和重现性也有待进一步提高.该研究的目的是利用化学发光技术,建立一种简便实用的DNA加合物检测新方法.其基本原理是利用特异的核酸酶水化DNA样品,加合物最终以二聚核苷酸(XpN)的形式存在,然后在T<,4>多聚核苷酸激酶(PNK)的作用下,将ATP分子的γ位磷酸转移标记到XpN的5端,因此样品中加合物的含量与ATP的消耗量成正比.利用化学发光法准确检测ATP的消耗量,根据ATP的消耗量确定加合物含量.
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