一株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及其基因组特性和致病性分析

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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是可引起各个年龄阶段猪发生感染的一种急性高度接触性传染病,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。PRRSV给养猪业造成了巨大的损失。PRRSV自1995年开始在中国出现以来,已持续流行了近25年,特别是2006年高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的出现,为中国养猪业带来了近乎毁灭般的打击。在与其漫长的斗争中,各种手段层出不穷,虽在一定程度上控制了PRRSV的肆虐,但目前仍未找到能够将其彻底清除的有效措施和防控手段。究其原因,从基因组角度讲,突变及重组是PRRSV不断进化的核心动力,PRRSV毒株的快速变异使其产生了谱系众多的毒株,而不同谱系毒株间亲缘关系较远,难以实现合理的交叉保护。此外,2014年前后出现的NADC30-like型PRRSV具备易于与其他毒株发生重组的特点,进一步加剧了PRRSV的防控难度。本研究立足养猪生产实际,2017年底自山东省某养猪场中采集了疑似PRRSV感染的发病猪病料,对其进行PCR检测证实其感染了PRRSV,之后对病料中的病毒进行分离,并通过观测细胞病变效应(CPE)、间接免疫荧光(IFA)等手段验证了病毒分离成功。我们随后对其进行噬斑纯化后测定了分离病毒SD-YL1712的全基因组,并对其进行了包括进化分析、氨基酸核苷酸同源性分析、重组分析等在内的基因组特性分析,发现分离毒株SD-YL1712属于JXA1-like和NADC30-like毒株在NSP2区发生重组形成的重组毒株,其与JXA1-like毒株保持最高的亲缘关系,但其NSP2区含有符合NADC30-like毒株特异性131个氨基酸不连续缺失特征的缺失模式。最后,我们以高致病性PRRSV毒株JXA1和低致病性PRRSV毒株CH1a作为对照,设计了动物攻毒实验,探究SD-YL1712分离毒株对仔猪的致病性。结果表明其能够引起仔猪表现严重的高热、呼吸困难、咳嗽、食欲废绝等临床症状,并能使仔猪继发严重的细菌感染而处于濒死状态。此外,剖检还见到其肺组织出现严重的间质性肺炎。总之,其具备与JXA1毒株相似的致病性,属于高致病性分离株。综上所述,本研究成功自养殖场中分离出一株由JXA1-like和NADC30-like毒株形成的重组毒株,该毒株对仔猪保持高致病性,属于高致病性PRRSV分离株。这为监测田间PRRSV流行情况、分析流行毒株更替及其基因组差异、探索NADC30-like毒株参与形成重组毒株的重组机制、重组后的基因组特性和致病性,从而开发能够对异源PRRSV毒株,特别是对NADC30-ike及重组毒株提供充足交叉保护效果的新型高效、广谱疫苗提供了一定的理论基础和数据支持。
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