稻瘟病抗性相关基因OsOGCP、OsDXR和OsRPA3a的克隆与功能初步分析

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水稻是世界上重要的粮食作物之一。发掘抗病基因,培育持久抗病的水稻新品种始终是一大研究热点。本论文在粳稻云引受稻瘟病菌诱导的转录组学数据分析基础上,筛选出可能与水稻稻瘟病抗性相关的3个基因,分别是:  (1)编码线粒体载体蛋白的AK068090(暂时命名为OsOGCP);  (2)编码1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸盐还原异构酶的AF367205(暂时命名为OsDXR);  (3)编码含OB-fold结构域的核酸结合蛋白的AK070400(暂时命名为OsRPA3a)。为了进一步确定这3个基因的功能,我们选用广谱抗稻瘟病品种云引和普感品种丽江新团黑谷(LTH)为材料,分别从云引和LTH中克隆了这3个基因并进行初步功能分析。主要研究结果如下:  1.分别以云引和丽江新团黑谷叶片的cDNA为模板,扩增3个目的基因的CDS和启动子序列。序列比对结果发现基因OsOGCP、OsDXR和OsRPA3a的CDS序列以及基因OsRPA3a的启动子序列各自在云引和丽江新团黑谷两个品种中完全一致,而且与NCBI中登录的序列相同;基因OsOGCP和OsDXR的启动子序列在云引和丽江新团黑谷两个品种中同源性分别为95.98%和98.78%。  2.利用RACE技术分别获得3个目的基因的cDNA全长序列,然后利用MEGA5.1分别构建相应基因的系统进化树,初步分析和预测这3个基因可能具有的功能,其中OsOGCP基因与禾本科黍属编码α-酮戊二酸载体蛋白的基因亲缘关系较近,且位于同一分支上;OsDXR基因与姜属编码1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶的基因有较近的亲缘关系;OsRPA3a基因与玉米属中编码逆转录转座子蛋白的基因亲缘关系较近。  3.通过实时荧光定量PCR技术分析这3个目的基因在受稻瘟病菌诱导后不同时间段的表达情况。结果表明,随着接种稻瘟病菌时间的推移,3个基因的表达量也发生相应的变化,说明这3个基因的表达受稻瘟病菌诱导。  4.分别构建了这3个目的基因的植物过表达载体、RNAi干扰表达载体和植物亚细胞定位载体,并通过农杆菌介导转入云引中,从而获得相应的转基因水稻植株,为后期的基因功能研究奠定了基础。
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