miR-16-1抑制A549细胞株生物学行为及非小细胞肺癌ARID1A基因表达的研究

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第一部分miR-16-1抑制A549细胞株生物学行为的研究目的:研究非小细胞肺癌miR-16-1的表达以及miRNA-16-1抑制A549细胞株生物学行为,为进一步研究非小细胞肺癌与miR-16-1的相互关系提供依据。方法:以A549肺癌细胞株和40例非小细胞肺癌病例为研究对象,应用qRT-PCR检测方法,比较肺癌组织和癌旁正常肺组织中miR-16-1的表达,研究非小细胞肺癌与miR-16-1表达的关系;通过lipofectamine2000转染在细胞体内有生物活性的has-miR-16-1mimics,应用qRT-PCR检测转染前后miR-16-1的表达情况;应用MTT、 AnnexinV/FITC-PI流式细胞术、Transwell等方法检测转染miR-16-1mimics前后A549细胞株的增殖、凋亡和侵袭性变化,研究miR-16-1对A549肺癌细胞株的生物学行为的影响。结果:40例肺癌组织和癌旁正常肺组织miR-16-1表达的比较结果显示,肺癌组织中miR-16-1的表达明显低于癌旁正常肺组织miR-16-1的表达,与癌旁正常肺组织比较,肺癌组织中miR-16-1的表达值平均只有癌旁正常肺组织的0.34倍,差异有统计学意义,p<0.05;A549转染hsa-miR-16-1mimics后,细胞周期检测结果显示细胞阻滞在G0-G1期,细胞的凋亡明显增加,A549细胞侵袭性明显降低,并且A549细胞的增殖活性降低。结论:miR-16-1有抑制A549肺癌细胞株生长、增殖和侵袭的作用,增加miR-16-1的表达可抑制肿瘤的进展,miR-16-1可能是治疗肺癌的一个潜在靶点。第二部分非小细胞肺癌ARID1A基因表达的研究目的:研究ARID1A在非小细胞肺癌以及A549细胞株中的表达,探讨ARID1A基因在非小细胞肺癌中的作用机制。方法:以A549肺癌细胞株和40例非小细胞肺癌病例为研究对象,应用免疫荧光和激光共聚焦技术检测肺癌细胞株A549中ARID1A的表达和定位情况;以qRT-PCR技术检测非小细胞肺癌中ARID1A的mRNA表达;通过western blotting和免疫组化技术检测ARID1A的蛋白表达,探讨非小细胞肺癌中ARID1A的表达与临床病理特点之间的关系,从而阐明在非小细胞肺癌中ARID1A基因表达的临床意义。结果:本组实验通过免疫荧光及共聚焦显微镜检测,结果发现ARID1A蛋白定位在细胞核,定位特异性高,在A549肺癌细胞株中存在ARID1A阳性表达。在40例非小细胞肺癌标本中,qRT-PCR检测结果显示ARID1A的mRNA表达下降,与癌旁正常肺组织的比较,平均值为癌旁正常肺组织的0.63,p<0.05,两者差异有统计学意义。western blotting检查和免疫组化的结果发现ARID1A肺癌组织中存在表达缺失,通过对肺癌组织和癌旁正常肺组织的比较,肺癌组织ARID1A的蛋白表达低于癌旁正常肺组织。ARID1A阳性表达发生在非小细胞肺癌的早期阶段,局限于Ⅰ、Ⅱ期,在有远处转移的组织中没有发现阳性表达;ARID1A阳性表达与性别、组织学类型和有无淋巴结转移无关。结论:非小细胞肺癌中ARID1A基因表达降低,其表达缺失与肺癌进展有关,其作为抑癌基因在肺癌的早期阶段发挥作用。
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