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银屑病是一种具有遗传背景,由环境、免疫、精神、感染等多因素诱发的炎症性皮肤病。其病程慢性,反复发作,发病机制尚未完全明确,根治困难。祖国医学多认为银屑病主要病机为"血分有热",血热证是其最常见的证型,其分子机制尚不明确,有待深入探究。研究发现NKT细胞、NK细胞在银屑病中存在异常,在银屑病发病中的作用有待研究。西医多采用系统使用免疫抑制剂、维甲酸类、生物制剂及外用糖皮质激素等治疗银屑病,均有一定的疗效,但有时也会因不良反应较重,患者耐受性差的问题。中药治疗银屑病血热证常采用清热凉血复方,有一定的临床疗效,副反应较低,患者耐受性好,但存在的问题是中药复方汤剂、现代中药复方制剂均成分复杂、作用机制不明等,限制了中药在临床的应用。千里光常被辨证用于银屑病血热证的中医治疗,有关千里光单味制剂治疗银屑病的临床疗效和安全性未见文献报道。本文检测了银屑病血热证患者外周血NKT细胞、NK细胞、二者皮肤归巢细胞亚群及各自的增殖、活化能力,初步探讨NKT细胞、NK细胞在银屑病血热证中可能的作用机制。并对千里光治疗银屑病血热证的疗效和安全性进行了初步研究。目的1.通过检测银屑病血热证患者外周血NKT细胞、NK细胞、二者皮肤归巢细胞亚群的百分比及它们的增殖、活化水平,探讨二者与银屑病血热证发病的相关性。2.观察千里光内服联合外用药治疗银屑病血热证的临床疗效及安全性。方法1.实验研究通过多色流式细胞术检测30例银屑病血热证患者外周血NKT细胞、NK细胞、皮肤归巢NKT细胞、皮肤归巢NK细胞的百分比以及它们各自增殖相关因子Ki-67和活化相关因子HLA-DR的表达水平,以21例健康人为对照。以CD3+CD56+标记NKT细胞,以CD3-CD56+标记NK细胞,以CLA+分别标记二者的皮肤归巢亚群,以Ki-67+分别标记以上细胞群的增殖水平,以HLA-DR+分别标记以上细胞群的活化水平。2.临床研究对2015年5月到2017年3月医院皮肤科门诊中符合银屑病血热证诊断患者84例进行临床观察。通过随机数字表法将84例银屑病血热证患者分为治疗组和对照组。对照组仅予外用药(卤米松乳膏于第1、2周使用;糠酸莫米松乳膏于第3、4周使用;丁酸氢化可的松乳膏于第5、6周使用。所有外用药均早晚各一次。)治疗组予千里光单味制剂(清热散结胶囊)口服(每次四粒,每日三次)。同时给予外用糖皮质激素,所用的药物、用药方法及疗程同对照组。共治疗6周,分别于2周、4周、6周时观察疗效,填写临床观察表(Case Report Form,CRF表),记录患者PASI评分、皮损面积及不良反应。6周时计算治疗后每组患者总有效率(根据治疗前后PASI评分计算疗效指数,通过疗效指数进行有效率判定),并进行安全性评估(监测血常规、尿常规及肝肾功能等的变化情况)。结果1.实验研究(1)银屑病组外周血NKT细胞百分比(8.21 ±12.59)%、NK细胞百分比(7.56士5.34)%,分别较各自对照组(11.61±8.25)%、(13.44±8.48)%显著降低,差异均具有统计学意义(Z值分别为-2.460、-2.689,P值均<0.05);银屑病组外周血CLA+NKT细胞的百分比(14.25±19.66)%、CLA+NK细胞百分比(15.21±23.19)%,分别与各自对照组(21.29 ± 30.27)%、(13.83±21.92)%相比,均无显著性差异(Z值分别为-0.861、-1.101,P值均>0.05)。其中,银屑病组外周血NKT细胞、NK细胞的百分比与PASI评分均无明显相关性(相关系数r分别为0.353、0.056,P值均>0.05),与BSA均无明显相关性(相关系数r分别为0.340、-0.035,P值均>0.05)。(2)银屑病组外周血表达Ki-67的NKT细胞百分比(11.55±6.30)%、表达Ki-67的CLA+NKT细胞百分比(42.85±19.89)%,分别较各自对照组(9.69±7.73)%、(30.73± 15.15)%显著升高,差异均具有统计学意义(Z值分别为-2.067、-2.374,尸值均<0.05);银屑病组外周血表达Ki-67的NK细胞百分比(18.02± 11.84)%、表达Ki-67的CLA+NK细胞百分比为(36.14±17.64)%,分别与各自对照组(20.00±20.89)%、(33.86± 19.36)%相比,均无显著性差异(Z值分别为-1.091、-0.354,尸值均>0.05);其中,银屑病组外周血表达Ki-67的NKT细胞、NKT皮肤归巢亚群百分比与PASI评分均无明显相关性(相关系数r分别为0.142、0.078,P值均>0.05),与BSA均无明显相关性(相关系数r分别为0.123、-0.056,P值均>0.05)。(3)银屑病组外周血表达HLA-DR的NKT细胞百分比(17.56±26.85)%、表达HLA-DR的CLA+NKT细胞百分比(33.94±24.28)%、表达HLA-DR的CLA+NK细胞百分比(44.40±32.14)%,分别与各自对照组(20.06±29.05)%、(33.70±29.14)%、(36.84±28.47)%相比,均无显著性差异(Z值分别为-1.263、-1.359、-0.775,尸值均>0.05);银屑病组外周血表达HLA-DR的NK细胞百分比为(43.09±34.28)%,较对照组(26.55±27.17)%显著升高,差异具有统计学意义(Z=-2.239,P<0.05)。其中,银屑病组外周血NK细胞活化水平与PASI评分(r =0.146,P>0.05)、BSA(r =0.180,P>0.05)均无明显相关性。2.临床研究84名银屑病血热证患者分为治疗组(n=42)和对照组(n=42)两组,其中治疗组有3名患者在治疗过程中脱落,对照组有4名患者在治疗过程中脱落。治疗前两组患者在性别、年龄、病程、PASI评分及BSA方面均无统计学差异。治疗组,患者治疗后PASI(1.35±1.19)低于治疗前(3.32±2.03),治疗后BSA(2.07±1.86)%低于治疗前(4.00 ± 2.44)%,差异均具有统计学意义(t值分别为8.117、6.874,尸值均<005)。对照组,患者治疗后PASI(1.96±1.43)低于治疗前(3.29±2.11),治疗后BSA(2.73±3.20)%低于治疗前(3.49±2.14)%,差异均具有统计学意义(t值分别为6.202、1.607,尸值均<0.05)。治疗结束后,治疗组PASI为1.35± 1.19,低于对照组1.96± 1.43,两组差异有统计学意义(t=-1.997,P<0.05);治疗结束后,治疗组患者BSA为(2.07±1.86)%,对照组为(2.73±3.20)%,两组无显著差异(Z=-0.811,P>0.05)。治疗结束后,治疗组总有效率为89.74%,高于对照组71.05%,两组差异有统计学意义(χ2=3.178,P<0.05);治疗组痊愈及显效的比率之和为56.41%,高于对照组的28.95%,两组差异有统计学意义(χ2=5.927,P<0.05)。治疗组及对照组在治疗前后血常规、尿常规及肝肾功能等实验室检测指标均无明显异常。结论1.银屑病血热证中外周血NKT细胞、NK细胞百分比的减少,可能与皮损中二者增加有关,提示其与银屑病皮损的形成可能有一定的关系,需要进一步研究证实。2.千里光联合外用药治疗银屑病血热证有一定疗效,安全性较好,值得开展大样本的临床研究,以进一步佐证其疗效和安全性,为银屑病临床治疗用药提供依据。