根瘤菌NGR234Ⅲ型分泌系统蛋白效应因子NopL的纯化及功能分析

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豆科植物能与根瘤菌形成共生根瘤将氮气转化为氨。由根瘤菌Ⅲ型分泌系统泌出的Ⅲ型蛋白效应因子在寄主特异性结瘤中起着非常重要的作用。NopL(nodulation outer protein L)是第一个被鉴定出来的由根瘤菌NGR234泌出的Ⅲ型蛋白效应因子,目前对于它在寄主植物中的分子功能还不甚了解。本论文中,在含有质粒pPROEX-InopL的大肠杆菌BL21(DE3)中表达nopL基因,纯化得到带有6×His标签的NopL重组蛋白并用于免疫兔子得到抗NopL的血清。制备的血清能够识别重组NopL蛋白(由大肠杆菌中表达)以及根瘤菌NGR234分泌的天然NopL蛋白(由类黄酮诱导的NGR234培养物上清中提取得到)。为了研究NopL在植物细胞中的功能,用含有质粒pTA7002,pTA7002nopL和pTA7002SIPK的农杆菌进行了烟草叶片注射转化实验。结果表明,在烟草(Nicotiana tabacum)叶片中共同表达nopL和:MAPK基因SIPK,能够抑制SIPK诱导的超敏反应(HR,hypersensitive response)。这一结果意味着NopL可以干扰MAPK信号通路。为了弄清NopL蛋白的结构,本论文首次尝试了NopL结晶条件的探索,并在此过程中建立了大规模纯化NopL的方法,得到的重组NopL蛋白用于初步结晶条件的筛选。此外还对NopL进行了点突变(Asp271突变为Ala)以研究其稳定性。
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