【摘 要】
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目的:通过吉西他滨化疗后上清液中产生的PGE2对胰腺癌细胞干性转化、细胞周期以及克隆能力影响的研究,进一步探讨PGE2对于肿瘤胰腺癌细胞干性转化及增殖影响的机制,为提高胰腺癌化疗药物疗效、设计靶向免疫治疗,防治复发提供新的理论支持。方法:(1)数据库分析PTGS2在胰腺癌组织的表达和对患者预后的影响。(2)以p53野生型胰腺癌细胞株capan-2为实验组,目前胰腺癌一线化疗药物吉西他滨作为化疗药物
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目的:通过吉西他滨化疗后上清液中产生的PGE2对胰腺癌细胞干性转化、细胞周期以及克隆能力影响的研究,进一步探讨PGE2对于肿瘤胰腺癌细胞干性转化及增殖影响的机制,为提高胰腺癌化疗药物疗效、设计靶向免疫治疗,防治复发提供新的理论支持。方法:(1)数据库分析PTGS2在胰腺癌组织的表达和对患者预后的影响。(2)以p53野生型胰腺癌细胞株capan-2为实验组,目前胰腺癌一线化疗药物吉西他滨作为化疗药物。Capan-2种于96孔板,加入不同浓度的吉西他滨,CCK8检测48h后细胞增殖情况,计算IC50,得到合适的药物浓度。(3)以上述药物浓度以及不同浓度的塞来昔布处理细胞48h,更换培养基,培养48h后收取上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测上清液中PGE2浓度并留取上清液进一步实验。(4)将Capan-2细胞种于6孔板中,细胞贴壁后分别给予不同的处理因素:培养基组(对照组);上清液组;塞来昔布组;DMSO组,P53抑制剂组。加入处理因素处理48h后,流式细胞术分析各组细胞周期的变化,克隆实验检测细胞的自我更新能力。(5)实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OCT-4、AKT、Sall4、P53 mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western Blot)检测OCT-4、p-AKT以及P53蛋白表达水平。结果:(1)数据库分析发现,PTGS2在胰腺癌组织中的表达增高,且对患者预后生存不利。(2)CCK8结果显示,不同浓度的吉西他滨均可显著抑制胰腺癌细胞的增殖。(3)ELASA结果显示:与对照组相比,上清液组中PEG2显著增高,而塞来昔布可显著抑制上清液中PEG2的浓度。(4)克隆实验结果显示:与对照组相比,上清液组细胞克隆能力增强(P<0.05),而塞来昔布组细胞克隆能力减弱(P<0.05)。(5)与对照组相比,上清液处理组胰腺癌细胞G2/M+S期比例增多(P<0.05),细胞增殖能力增强,而塞来昔布处理组细胞G2/M+S期比例降低,细胞增殖能力减弱(P<0.05)。(6)上清液处理组胰腺癌细胞后干性相关蛋白及基因表达的显著增强,(P<0.05);而塞来昔布组干性相关蛋白及基因的表达减弱(P<0.05)。(7)进一步探索机制时发现,上清液处理组p-AKT蛋白和mRNA表达增强,p53蛋白和mRNA表达量减弱;塞来昔布组p-AKT蛋白和mRNA表达显著减弱,P53蛋白和mRNA表达增强(P<0.05)。加入P53抑制剂后,抑制剂组和上清液组胰腺癌细胞的干性相关蛋白OCT-4表达同时显著增强;G2/M+S期所占比例增多(P<0.05)。结论:吉西他滨化疗后可以引起凋亡肿瘤细胞释放大量PGE2,从而激活PGE2/AKT信号通路,导致P53降解,促使肿瘤细胞干性增强和细胞增殖。塞来昔布可以增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
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