柑橘溃疡病（citrus bacterial canker disease, CBCD）是由黄单胞菌属的柑橘黄单胞柑橘亚种（Xanthomonas citri subsp. citri,简称Xcc）引起的一种危害全球柑橘种植业发展的重大检疫性病害之一,广泛发生在世界各主要柑橘产区,包括亚洲、大洋洲、马来群岛以及南北美洲。柑橘溃疡病菌能感染绝大多数栽培柑橘品种,虽然很少会将寄主直接杀死,但会导致落叶、落果、树势衰弱、果实生锈斑和品质变劣,严重降低了商品价值。长期以来由于特效药剂和抗病品种的缺乏,只能采取强化植物检疫,严防疫害传入,对病树挖除并集中烧毁的根除方法。目前我国正在实施柑橘非疫生产区建设,迫切需要建立特异、快速、准确的诊断技术及防控措施。基因工程重组单抗（包括Fab,scFv,Fv等）兼具诊断和治疗双重功能,是一种新型的免疫学检测试剂,利用抗原-抗体特异性结合原理,可用于植物病害、人类疾病的诊断、治疗和预防。而且与单克隆或多克隆抗体相比,重组单抗具有高特异性,高亲和力,低检测限,易于在原核系统中大量表达等优点。scFv抗体由于具有低或无免疫原性、分子量小、组织穿透力强,成本低,可以大规模生产等特点已被广泛应用于医学领域,但是在很多情况下容易聚集,不稳定,制约了其在实际中的应用。而Fab抗体是由抗体的轻链片段及重链Fd段组成的,与单链抗体scFv相比,具有稳定性好,制备简单,可直接在大肠杆菌中表达有活性的抗体等优点。目前,关于抗柑橘溃疡病菌的Fab重组抗体尚未见报道,因此,本研究利用噬菌体抗体库技术构建了Fab抗体文库,可望为柑橘溃疡病血清学诊断提供新型的诊断试剂,而且还可望用于对靶标细菌的免疫抑制以及阐明靶标病原细菌与寄主细胞相互作用、识别入侵的分子机理提供新的技术。主要研究结果如下:①用生理盐水稀释的柑橘溃疡病菌细胞悬浮液免疫BALB/c小鼠,免疫后小鼠抗血清效价为6400倍左右,符合建库要求。②提取小鼠脾细胞总RNA反转录成cDNA第一链,用特异性的引物通过PCR条件的优化分别成功扩增出了抗体的轻链（680bp左右）及重链的Fd段（680bp左右）基因,并且通过序列测定比对,进一步证实了扩增出的为抗体相应基因。③通过Sac I、Xba I位点,将轻链基因连接到载体pComb3x,成功构建了抗体轻链文库,其库容量为1×10⁶,重组率为100%。④通过Xho I、Spe I位点,将抗体重链Fd段基因连接到抗体轻链文库中,成功构建了库容为2×10⁶,重组率为80%的Fab抗体文库。经过辅助噬菌体VCSM13感染,抗柑橘溃疡病噬菌体抗体库的滴度达到2.4×10¹¹ cfu/ mL。