论文部分内容阅读
目的:建立用超高效液相色谱检测大鼠血浆中茶碱浓度的方法。研究黄芪注射液对氨茶碱在大鼠体内药物代谢动学的影响。 方法:1.大鼠血浆中茶碱浓度的超高效液相色谱检测方法:Waters ACQUITYH-class超高效液相色谱仪,色谱柱为UPLC(R)BEH C18 column(2.1×50mm,1.7μ m),采用梯度洗脱法,流动相A为水,流动相B为乙腈,流速为0.2mL·min-1,检测波长为273nm,以咖啡因(50μ g·mL-1)为内标物。血浆样品用乙酸乙酯萃取,氮气流挥干后用甲醇-水(10∶90,V/V)溶液复溶,取2μL进样检测。 2.药代动力学实验:取健康雄性SD大鼠12只,随机分为合用组和单用组,各6只。合用组持续给于黄芪注射液(4g·kg-1·d-1,ip)10天,不限制进食及饮水,于第十天给药之前禁食12h,不限制饮水,给予黄芪注射液(4g·kg-1·d-1,ip)和氨茶碱注射液(20.8mg· kg-1,ig)。单用组于给药前禁食12h,不限制饮水,灌胃给予氨茶碱注射液20.8mg· kg-1。并于给药前和给药后10min、20min、30min、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、10h、12h尾静脉取血0.3mL,置于加肝素的离心管中,以13000r·min-1离心10min后取血浆,保存于-40℃冰箱中。用超高效液相色谱测定血浆中茶碱的浓度。用DAS3.0软件分析两组药代动力学参数,绘制血药浓度-时间曲线,对药动学参数进行正态性检验和方差齐性检验后,用两样本均数成组t检验和Wilcoxon秩和检验进行统计分析,取P<0.05有统计学意义。 结果:1.在UPLC条件下茶碱和内标咖啡因分离完全,峰型完好,内源性杂质无干扰。咖啡因的保留时间为2.42min,茶碱的保留时间为2.06min。茶碱在0.0025~25μ g·mL-1浓度范围内线性关系良好,回归方程y=0.1201x+0.0475(R2=0.9979,n=8),定量下限为0.0025μ g·mL-1;茶碱在低、中、高三种浓度的日内精密度RSD分别为8.15%,4.06%,3.07%,日间精密度的RSD分别为8.17%,3.26,%,3.09%;相对回收率在93.04%~105.28%之间,绝对回收率在66.68%~78.45%之间;血浆样品在室温条件下,冰冻条件下和冻融条件下的稳定性良好。 2.氨茶碱单独用药组和黄芪注射液与氨茶碱合并用药组的药动学参数AUC(0-12)分别为:(279.4417±44.1887)mg·h·L-1和(196.0227±29.3089)mg·h·L-1,t1/2分别为(2.637±0.808)h和(2.56±1.756)h,MRT(0-12)分别为(4.182±0.63)h和(3.519±0.541)h,Vz/F分别为(0.267±0.087)L·kg-1和(0.336±0.121)L·kg-1,Clz/F分别为(0.07±0.009)L·h-1·kg-1和(0.103±0.022)L·h-1·kg-1,Tmax分别为(0.944±0.828h)h和(0.792±0.641)h,Cmax分别为(61.423±17.958) mg·L-1和(52.137±11.135) mg·L-1。结果表明两组间药动学参数MRT(0-12),t1/2,Vz/F,Tmax,Cmax差异无统计学意义(P>0.05),AUC(0-12)和Clz/F的差异有统计学意义(P<0.05),合并用药组的AUC(0-12)比单独用药组降低了29.85%,Clz/F提高了47.14%。 结论:1.本实验建立了UPLC法测定血浆中茶碱的浓度,本法具有操作简便、反应灵敏、分析快速、线性范围宽、稳定性好等特点,是一种优越的监测血中茶碱浓度的检测方法。 2.黄芪注射液在大鼠体内对氨茶碱的代谢有诱导作用,联合用药时应注意调整给药剂量,以免影响治疗效果。