【摘 要】
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血管生成素(angiogenin,ANG)是一个强有力的促血管生成因子,与肿瘤的发生、发展密切相关。随着对ANG研究的深入,越来越多的证据从不同方面显示ANG参与血管生成所必需的一系列
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血管生成素(angiogenin,ANG)是一个强有力的促血管生成因子,与肿瘤的发生、发展密切相关。随着对ANG研究的深入,越来越多的证据从不同方面显示ANG参与血管生成所必需的一系列生理过程。然而,对ANG诱导血管新生机制的认识还不全面,有待进一步研究。 基于蛋白质相互作用在生命活动中的关键作用,我们拟采用一系列蛋白质相互作用的研究手段,来筛选和鉴定血管生成素的相互作用蛋白,进而分析其促血管新生的分子机制。实验室前期工作已经利用酵母双杂交的方法从人的心肌cDNA文库中筛选到了一些可能与血管生成素有相互作用的蛋白质,其中一个重要的蛋白就是解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)。本研究的目的就是要利用蛋白沉降实验(pull down)、免疫共沉淀(Co-IP)和荧光共振能量转移(FRET)三种方法来验证ADAM33和血管生成素之间相互作用的真实性。为此,我们首先从质粒pPC86-ADAM33中扩增出ADAM33基因片段,并克隆到原核表达载体pET28a和体外表达载体pCMVTnT,构建原核表达质粒pET28a-ADAM33和体外表达质粒pCMVTnT-ADAM33。利
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