背景胃癌在世界范围内一直是一个严重威胁人类健康的疾病,其发病率在所有恶性肿瘤中占第二位,死亡率占全部癌性致死性疾病的第二位。在消化道恶性肿瘤中占首位。虽然近年来内镜、手术、化疗、靶向等诊疗手段均有了一定的提高,但目前胃癌患者5年生存率仍低于30%。既往研究关注基因组学、表观遗传学、蛋白质组学等方面的变化。如原癌基因的激活或(和)抑癌基因的失活、蛋白相互作用,信号传导通路,调控网络等。有些研究有些成果已用于临床,如基因HER2靶向治疗在乳腺癌中的应用,为部分患者带来益处。HER2的检测在乳腺癌中已成常规,但在胃癌尚不是,多需专门提出,但准确测定并监测胃癌患者体内HER2状态,对于合理应用HER2靶向治疗及评估预后均至关重要。目前其检测手段是荧光原位杂交分析(FISH)和免疫组织化学,在临床应用中有一定的局限性,比如第一,两种方法有13%左右的不一致率,第二,免疫组化是半定量检测,主观性较强,而FISH检测耗时且昂贵。第三,血清中HER2的情况可以在曲妥珠单抗治疗过程中发生变化,而FISH及免疫组织化学都不能实时监测,这些均不完善,成为本课题第一部分产生的初衷。肿瘤分子生物学的研究,除了对只占全部基因组2%的编码基因的研究之外,还有很多未知领域,新一代基因测序技术及高通量筛选方法发展,使大量非编码RNA被发现,非编码RNA主要包括长链非编码RNA(long non-codingRNA,lncRNA)和微小RNA(microRNA,miRNA)。最初认为非编码RNA无功能,随着全部人类基因组测序的完成,人类的疾病并没有随之迎刃而解。所以人们开始关注数量众多却被忽视的非编码RNA的研究。近些年miRNA在肿瘤生物学的调控作用已有广泛研究。然而,lncRNA的数量众多,功能多样,可在表观遗传学、转录及转录后等水平参与基因表达的调控。相关研究尚较少,特别是在胃癌的研究上更是刚刚开始,本研究通过对胃癌及癌旁组织异常表达的lncRNA研究,有望发现新的与胃癌相关的lncRNA,作为胃癌诊断治疗新靶点,从而形成了论文的第二部分。第一部分胃癌患者血清HER2水平检测与组织HER2表达相关性及临床意义目的:探索血清(胞外域)HER2水平与组织内HER2水平的相关性,探索血清HER2水平对胃癌患者的作用。方法:收集解放军总医院2012年12月-2013年6月期间239例胃癌库中患者资料。应用化学荧光法检测血清HER2水平,应用荧光原位杂交分析(FISH)及免疫组织化学的方法,检测组织内HER2水平。画出受试者工作特征曲线(ROC),确定出预测胃癌患者生存的血清HER2水平的最佳截断值。结果:血清HER2水平与组织内HER2水平、肿瘤体积、肠型胃癌等均显著相关,血清HER2水平在组织内HER2阳性的患者与组织内HER2阴性患者间有显著的差异。得出曲线下最大面积为0.79(95%CI: 0.71-0.87, P< 0.001)。敏感度及特异度分别为0.54 (95%CI:0.37-0.70)和 0.93 (95%CI:0.88-0.96)。此时的截断值为 24.75ng/mL。高的血清 HER2水平对胃癌患者总体生存率呈负相关关系。(hazard ratio: 1.93,95%CI: 1.32-4.38, P =0.006)。结论:血清HER2水平可以作为一个能替代组织内HER2表达情况的特异性较高的标志物,HER2水平>24.75ng/mL提示预后不佳。第二部分过表达lncRNA-p2819对胃癌细胞BGC-823增殖、凋亡和侵袭的影响目的:为了明确胃癌及癌旁组织中有哪些差异表达的lncRNA,这些差异表达的lncRNA有无临床意义,干扰这些lncRNA对胃癌肿瘤生物学行为有何影响。方法:(1 )收集2014年6月-2015年10月期间解放军总医院胃癌患者标本90例,利用人类lncRNA芯片,取5对胃癌与癌旁组织标本筛查差异表达的lncRNA,按照变化倍数、可靠性p值、可能的靶基因信息分析,是否已有文献报道等筛选原则选定候选lncRNA,然后扩大样本量13例,对候选的4个lncRNA进行qRT-PCR验证,从中选出具有潜在临床意义的目标lncRNA。扩大样本量到72例,行qRT-PCR检测,并分析lncRNA表达量与临床参数如肿瘤部位、大小、淋巴结转移,分化程度等的相关性。(2)针对目标lncRNA做功能试验,通过基因重组,构建真核表达载体,将重组质粒转染BGC-823胃癌细胞系,通过MTT, AnnexinV/PI, Transwell检测过表达LncRNA对细胞的增殖,凋亡以及侵袭的影响。结果:(1)芯片筛查发现5445差异表达的lncRNA,其中差异倍数超过2倍,可靠性p值<0.05的lncRNA为19个上调,56个下调,候选 4 个 lncRNAp2819 (下调)、P17382 (上调)、P24084 (上调)、P27873 (上调)扩大到13对独立胃癌及癌旁标本行qRT-PCR验证。验证结果均与芯片结果一致,4个候选lncRNA在癌与癌旁正常组织的表达差异均具有统计学意义(分别为P2819:2-△△ct, 0.012 VS0.401; P=0. 01; P17382: 2-△△Ct, 0.572 VS0.061; P=0.01; P24084:2-△△Ct, 0.243 VS0.081; P=0.03; P2819: 2-△△Ct,0.312 VS0.091; P=0.03;)。最终选出差异倍数最大的lncRNAp2819,对72例胃癌标本行qRT-PCR检测,发现其表达量与肿瘤大小,部位,TNM分期显著相关,与年龄、性病无显著性相关。(2)构建pcDNA3.1(+)-p2819质粒,成功通过验证,肿瘤细胞BGC-823转染后过表达lncRNAp2819,通过MTT检测发现p2819可明显抑制细胞增殖。通过流式检测p2819过表达可以明显促进肿瘤细胞凋亡。对照组细胞总凋亡0.9%;转染组总凋亡62.8%;(p<0.01 )。Transwell实验检测p2819对细胞的侵袭的影响,见转染LncRNA-p2819组对细胞侵袭有一定抑制作用。结论:芯片筛查出多个胃癌相关lncRNA,与胃癌肿瘤特征具有相关性,其中LncRNA-p2819过表达后对BGC-823细胞产生抑制增殖,促进凋亡,抑制侵袭的作用,说明其具有抑癌基因的特性。其作用机理及潜在临床应用价值尚待进一步研究。