邻苯二酚2,3-双加氧酶是芳香族化合物微生物降解途径中最重要的酶,此酶可以催化邻苯二酚形成2-羟基黏糠酸半醛。由于邻苯二酚2,3-双加氧酶在环境保护中具有潜在应用价值,目前,已从不同细菌中筛选到邻苯二酚2,3-双加氧酶。本实验室在污水处理厂的活性污泥样品中,筛选出一株具有降解酚类化合物功能的Thauera sinica K11。首先,利用单因素实验和响应面实验法对Thauera sinica K11进行了培养组成优化,以提高邻苯二酚2,3-双加氧酶的产量和活性,最终确定该菌产酶的最佳培养基成分为:苯酚308.0 mg/L、硫酸铵153.1 mg/L、磷酸盐2.7 g/L,在最优培养基组成条件下,邻苯二酚2,3-双加氧酶的最大酶活为1921 U/L。其次,利用尺寸排阻色谱法从Thauera sinica K11菌株中分离提取到高纯度的邻苯二酚2,3-双加氧酶,并对结构性质进行了系统表征。结果表明,该酶的分子量为140 kDa,由四个相同的亚基组成,每个亚基含有一个Fe²⁺离子;该酶在稀溶液中的粒径为14.5 nm,其二级结构以β-折叠为主（51.1%）;最适反应条件为45^oC、pH 8.4;该酶在pH 8-11和温度小于50^oC时,稳定性较好;该酶的K_m和V_max分别为20.36μM和105.28 mU mg^-1。另外,Cu²⁺对该酶的促进作用最高;溶氧过高或过低,对酶活都会产生抑制的作用;EDTA和叠氮化钠对酶的抑制作用不明显,而H₂O₂能够使酶失活;该酶可以降解单环酚类化合物,且具有相对较宽的底物特异性。最后,利用基因工程技术成功构建了生产邻苯二酚2,3-双加氧酶的重组菌株E.coli BL21/pET28a（+）-C93O,通过诱导表达实现了该酶的重组表达。在此基础上,利用亲和层析技术分离得到高纯度的重组邻苯二酚2,3-双加氧酶（C93O）,并对其部分结构性质进行了表征。结果表明,邻苯二酚2,3-双加氧酶经重组表达后,酶的产量有了较大提高,且最适反应条件变为pH 8.0和50^oC,Mg²⁺对该酶的促进作用最高。