肝细胞性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一种发病率和死亡率都很高的恶性肿瘤,在全球的恶性肿瘤致死率的排名位列第三。鉴于肝细胞癌初次发病隐匿、发展快、分化程度低、转移和侵袭能力强、术后复发率比较高等原因,所以肝癌患者的总体预后差。虽然临床上有诸多的治疗方法包括肝切除、肝移植、射频消融、微波治疗肝癌取得良好的疗效,但经过治疗的肝癌病人仍有很高的复发率和转移率,所以,进一步探索肝癌发生以及其转移相关的机制十分重要。肝癌的发病和进展是多因素、多进程、多层面的,包含抑癌基因的突变导致其功能减弱或丧失、促癌基因和癌基因的异常表达和激活。多方面的原因导致肝脏细胞功能出现紊乱,肝内微环境调节障碍,细胞基质受到大量破坏,肿瘤血管生成和抗血管生成功能失去平衡,最终形成肝脏恶性肿瘤。所以,积极探索和寻找一个或几个肝细胞癌早期的蛋白标志,针对性查找肝癌转移相关的标志物,用于早期发现肝细胞癌和预防恶性肿瘤转移有着非常重要的意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)一般是指大于200个核苷酸的RNA分子,它是一种缺乏蛋白编码能力的RNA。大量的研究结果表明,lnc RNAs在肝细胞癌中的发病过程中有着多重作用,通过多种方式参与表观遗传、转录前、转录中以及转录后水平的基因调控。大多数编码蛋白基因与lnc RNA存在着相应的顺式调节关系,在相同的染色体基因座中,在蛋白编码基因的侧翼10kb之内存在着相对应的长链非编码RNA,该lnc RNA能影响蛋白编码基因的表达水平,具有调控相应蛋白编码基因的潜在能力。多聚胞嘧啶结合蛋白1,也可称为hn RNP E1,其基因位点位于2p12-13,有三个KH域,拥有特殊的分子结构为αβααββα,该结构为RNA多聚胞嘧啶提供了结合位点。既往的研究表明PCBP1参与肿瘤的迁移、浸润和转移过程。目前尚无关于PCBP1在HCC中具体作用机制的相关研究,因此,多聚胞嘧啶结合蛋白-1反义RNA1(PCBP1-AS1)是否影响蛋白PCBP1还需要进一步探索。本研究中我们利用芯片技术识别肝细胞癌患者的术前和术后的血浆中的lnc RNA,发现PCBP1-AS1在术前标本中呈升高趋势,在术后标本中呈下降趋势。采用q RT-PCR技术检测109例肝癌组织及癌旁组织RNA的表达水平,结果显示PCBP1-AS1在肝细胞癌组织中呈高表达,癌旁组织中相对低表达。进一步对109例病人的临床病理资料进行分析,经过单因素分析显示PCBP1-AS1与肿瘤的大小、浸润、转移有明显的统计学意义。PCBP1-AS1异常高表达促使肿瘤生长快,容易出现肝内外转移,病人的生存期明显降低。进一步进行体外细胞功能实验,使用实时荧光定量PCR对肝细胞癌细胞株和正常L02肝细胞株进行检测,从而筛选出细胞系用于构建PCBP1-AS1过表达和干扰细胞株。利用克隆形成实验、EDU、CCK8实验研究发现PCBP1-AS1可以促进肝癌细胞的增殖,细胞划痕实验和细胞迁移、侵袭实验发现PCBP1-AS1促进肝癌细胞侵袭和迁移。我们建立了裸鼠皮下异种移植模型和尾静脉异种移植模型进行动物实验,结果表明PCBP1-AS1过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭,从而促进体内HCC的生长和肺转移。通过相似的实验方法检测PCBP1的m RNA和蛋白的表达水平,体内外实验证实PCBP1抑制肝癌细胞的迁移和侵袭作用,PCBP1过表达降低了肿瘤细胞的迁移、侵袭和肺转移,这与PCBP1-AS1对HCC的作用完全相反。为了后续的机制研究,我们利用FISH实验和ISH实验证实PCBP1-AS1和PCBP1大部分定位在细胞质内,RNA pull down实验发现PCBP1-AS1与PCBP1有很强的结合,RNA免疫沉淀证实PCBP1-AS1与PCBP1抗体发生富集。我们对Hu H7-LV-NC和Hu H7-LV-PCBP1-AS1细胞进行细胞测序,实验结果再次证实了PCBP1-AS1促进肝癌细胞增殖和转移,PCBP1-AS1参与的生物学功能与PI3K-Akt信号通路密切相关。在沉默PCBP1-AS1或过表达PCBP1-AS1的细胞通过检测AKT水平是保持不变的,但我们采用免疫印迹检测PCBP1-AS1与PRL-3蛋白表达和P-AKT磷酸化水平呈正相关,最终影响到AKT通路,PCBP1-AS1过表达诱导PRL-3-AKT信号通路的激活,从而出现PCBP1-AS1高表达可以通过PCBP1-AS1介导从而调控PCBP1-PRL3-AKT轴促进HCC增殖和转移。综上所述,本文对PCBP1-AS1在肝细胞肝癌中的发生和发展有着重要的作用,尤其是肿瘤细胞的增殖和转移的机制进行了研究,并基于PCBP1抑制肝癌细胞的增殖和转移,深入探讨了PCBP1-AS1调控PCBP1-PRL3-AKT轴,抑制靶蛋白PCBP1,从而促进肝癌增殖和转移的可能机制。