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铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo.)为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年附生草本植物,是传统名贵中药材,其所富含的石斛多糖具有提高机体免疫、抗肿瘤、抗氧化等药理作用。由于多糖成分复杂,分离难度大,目前为止,尚未有对铁皮石斛多糖进行系统性的研究。因此,对铁皮石斛多糖进行系统的分离纯化,并对各均一组分多糖进行组成分析及结构解析,研究其体外抗氧化活性,探讨其与结构之间存在的关系,对铁皮石斛的科学使用具有重要意义。 本论文结合多种多糖分离方法,通过阴离子交换剂柱色谱(DEAE-Cellulose-52)、具分子筛效应的丙烯葡聚糖柱色谱(Sephacryl S-200)对铁皮石斛水溶性多糖进行多级分离纯化,得到3种均一组分的中性多糖DONP1-b、DONP2-a、DONP3-a,以及3种均一组分的酸性多糖DOAP1-d、DOAP2-c和DOAP3-b。 通过凝胶色谱(GPC)、气相色谱(GC)、液相色谱(HPLC)、紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、核磁氢谱(1H-NMR)以及高碘酸氧化和Smith降解测定多糖的理化性质并推断多糖一级结构。结果表明,3种中性多糖(DONP1-b、DONP2-a、DONP3-a)的分子量范围分别为661.38 KDa、378.21 KDa和163.55 KDa,3种酸性多糖(DOAP1-d、DOAP2-c、DOAP3-b)的分子量范围分别为530 KDa、13.8KDa和130.2 KDa。在单糖的组成上,3种中性多糖均由葡萄糖和甘露糖组成,酸性多糖DOAP1-d和DOAP2-c则由葡萄糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖构成,DOAP3-b另包含鼠李糖和半乳糖醛酸两种单糖。红外光谱显示:3种中性多糖不含酸性基团,3种酸性多糖均含酸性基团,且3种中性多糖和DOAP1-d酸性多糖均含有α-呋喃型糖苷,酸性多糖DOAP2-c和DOAP3-b则含有α-吡喃型糖苷。高碘酸氧化、Smith降解及核磁氢谱显示:中性多糖主要由抗氧化的1→3-构型糖基构成,而酸性多糖则由可氧化的1→2-构型、1→4-构型及1→6构型糖基构成。 利用ABTS、清除羟基自由基、清除DPPH自由基、清除NO、还原铁离子能力以及螯合亚铁离子实验评价6种多糖的体外抗氧化活性发现,3种酸性多糖的抗氧化活性远强于3中性多糖及粗多糖,在高浓度条件下(5 mg·mL-1),酸性多糖抗氧化活性接近Vc。 综上,本论文较为系统地分离了铁皮石斛水溶性多糖,得到6种均一多糖,其中包括3种首次分离得到的酸性多糖,并对其进行理化性质测定、一级结构推断及抗氧化活性研究,发现铁皮石斛酸性多糖具有良好的体外抗氧化活性,这些成果将为铁皮石斛的药理药效研究和质量评价提供一定的理论参考。