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本课题目的是对甘油解反应生成1,3-甘油二酯进行深入研究。首先对黑曲霉GZUF36发酵产脂肪酶环境条件进行优化,得最佳培养环境:时间为72h,接种量为3%,250mL三角瓶装液量为40m L,温度为28℃,转速为180r/min。在最佳环境条件下,1,3-DAG的得率为23.865%,1,3-DAG的选择性为82.955%。为了更好的适应于工业化生产,在实验室选取5L的小型发酵罐进行发酵罐培养,发现发酵罐培养在96h时,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性达到最大,分别为25.300%,82.018%。接着考察了水活度对甘油和甘油三酯催化甘油解反应制备1,3-DAG的反应规律,发现在aw=0.528时,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性分别为25.822%和84.037%。接下来考察反应体系水活度控制方式对1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性的影响规律,发现将aw=0.58的水合盐分别添加到全细胞脂肪酶酶酶粉和反应体系分别进行预平衡3天后效果较好,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性分别为26.100%和83.056%。然后用aw=0.528的饱和盐预平衡全细胞脂肪酶酶粉,aw=0.58的水合盐预平衡反应体系,可进一步提高酶的催化性能。为消除底物粘性带来的副作用,首先,选取不同吸附物质,分子筛、活性炭、竹炭纤维、海绵和大孔吸附树脂(AB-8、D101、HPD750、NKA-9和NKA-II),对1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性影响,并研究了最佳吸附物质的质量对其影响。结果发现分子筛对底物消除粘性的作用最好,并且其量为0.3g时,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性最高,分别为30.070%和83.617%。接着研究了AB-8、D101、HPD750、NKA-9和NKA-II五种大孔吸附树脂对1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性的规律性影响。得出大孔吸附树脂AB-8对降低底物的粘性作用最好,并且其量为0.3g时,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性最高,分别为30.097%和83.902%。为了能更好的降低底物粘性对反应的副作用,选取时间梯度增加底物的方法来消除底物粘性。结果显示三次添加底物结果最好,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性分别为27.529%和85.004%。为了更好的适应工业化生产,我们采用聚氨酯泡沫颗粒作为固定化载体,对黑曲霉GAUF36实现边固定化边产酶发酵。首先我们对固定化方式进行了研究,发现通过种子培养,将种子液添加到含有聚氨酯颗粒的发酵培养基中的方式结果最好,其1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性分别为26.023%和83.940%。接着对其固定化载体聚氨酯泡沫颗粒大小进行了研究,发现聚氨酯泡沫颗粒大小为5mm×5mm×5mm时,1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性最高,分别为27.303%和83.638%。为了能增加固定化细胞的稳定性,发现经过戊二醛前处理的固定化细胞入反应体系后1,3-DAG的得率和1,3-DAG的选择性最高,分别是28.407%和84.354%。最后对固定化细胞和游离的全细胞脂肪酶的重复利用进行了考察,结果显示固定化细胞的重复利用率要高于游离的全细胞脂肪酶。