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猪流感是由猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)引起的不同日龄、性别和品种猪只的一种急性、热性和高度接触性的呼吸道传染病,其临床上以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭和死亡为特征。1918年美国首次报道了SI的暴发,1930年Shope从猪体中首次分离到了H1N1亚型猪流感病毒。猪是禽、人、猪流感病毒重组和复制的“混合器”,猪流感病毒不需重组就有最大限度感染人的能力。而且,早期的人流感病毒还可以储存于猪体内,并在一定时期内再次感染人。目前,常见的猪流感主要有H1N1、H1N2和H3N2等3种亚型。根据GenBank发表的猪流感血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因序列设计引物,扩增出猪流感病毒A/Swine/Guangdong/LM/05 (H1N1)和A/Swine/Henan/S4/04 (H3N2)的HA和NA基因片段,将其克隆到pFastBacGP67杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1、pFastBacGP67C-H3和pFastBacGP67A-N1、pFastBacGP67C-N2,转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体获得重组转座子rBacmid-H1、rBacmid-H3和rBacmid-N1、rBacmid-N2,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H1、rBv-H3和rBv-N1、rBv-N2,再感染细胞,收获目的蛋白。通过血凝试验(HA蛋白)、SDS-PAGE、免疫印迹法、免疫组化分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物学活性。利用表达的HA蛋白作为猪流感间接ELISA的抗原,初步建立H1和H3亚型猪流感的间接ELISA检测方法,并对内蒙古、辽宁和黑龙江等地猪场送检的93份猪血清进行了检测。H1间接ELISA的结果有29份血清样品呈阳性,阳性率为31.18%。HI试验有24份血清样品呈阳性,阳性率为25.81%,和ELISA所检测结果有29份阳性血清样品相比,符合率为94.62%;H3间接ELISA的结果有43份血清样品呈阳性,阳性率为46.24%。HI试验有36份血清样品呈阳性,阳性率为38.71%,和ELISA所检测结果有43份阳性血清样品相比,符合率为92.47%;H1和H3间接ELISA的结果有17份血清样品呈阳性,阳性率为18.28%。HI试验有15份血清样品呈阳性,阳性率为16.13%,和ELISA所检测结果有43份阳性血清样品相比,符合率为97.85%;可见间接ELISA方法比HI试验方法敏感。表明在我国北方的某些省份猪群中已广泛存在有H1和H3亚型的猪流感病毒,对猪群接种商业化的猪流感疫苗已迫在眉睫。本研究为研制开发快速、准确、简便的猪流感鉴别诊断试剂盒奠定基础,能够用来对我国猪流感的流行情况进行监测。