海马是哺乳动物中枢神经系统的重要组成部分,对学习、记忆等生理过程起到至关重要的作用,但对缺血缺氧最为敏感,损伤也最严重。缺血缺氧性脑损伤(hypoxic-isc hemic brain damage,HIBD)因其发病率高、致死率高、致残率高,所以治疗困难,造成的后果严重,使患者生活质量受到极大影响,也给家庭及社会造成了巨大的危害。因此,本研究通过建立体外缺血缺氧模型,探讨HIBD对小鼠海马造成的损伤、损伤机制及DNA甲基化水平的改变。目的:(1)探讨缺血缺氧性脑损伤对小鼠海马的炎症损伤作用;(2)探讨缺血缺氧性脑损伤对小鼠海马DNA甲基化水平改变的影响。方法:(1)利用C57BL/6J野生健康成年小鼠建立体外缺血缺氧性脑损伤模型,分为正常对照组(正常培养基培养海马脑片)、缺血缺氧实验组(利用无糖培养基培养海马脑片模拟缺血,用缺氧罐充入95%N2、5%CO2培养模拟缺氧)。模型建立后用2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride(TTC)法检测建模是否成功。经TTC染色后正常对照组显示红色,缺血缺氧实验组显示苍白色,说明模型建立成功。(2)将对照组和实验组海马脑片,用免疫组织化学荧光染色法检测c-fos、COX2、5-mc、DNMT3a、MBD2的表达情况,Western blotting蛋白半定量检测NF-κB、c-fos、COX2、DNMT1、DNMT3a、MBD2的表达,以对海马炎症损伤及DNA甲基化水平变化进行研究。结果:(1)缺血缺氧性脑损伤对小鼠海马炎症损伤的影响:在免疫组织化学染色实验中,缺血缺氧实验组海马脑片炎症损伤细胞明显多于对照组(P<0.01);Western blotting蛋白半定量检测结果和免疫组织化学染色法结果相一致;(2)缺血缺氧性脑损伤对小鼠海马DNA甲基化水平的影响:免疫组织化学染色显示,缺血缺氧实验组海马脑片DNA甲基化相关酶的阳性细胞表达数明显多于对照组(P<0.01),实验组DNA甲基化水平高于对照组,Western blotting蛋白半定量检测结果和免疫组织化学染色法结果相一致,但DNMT1对照组和实验组表达量无差异(P>0.05)。结论:(1)建立了离体的缺血缺氧脑片模型。(2)脑片缺血缺氧可促发炎症反应对海马组织造成损伤。(3)缺血缺氧致DNA甲基化水平升高,提示DNA甲基化可能参与缺血缺氧组织损伤过程,机制可能是HIBD影响DNA代谢活动,诱导DNA甲基化水平升高,DNA甲基化调控相关基因表达产生氧化应激,促发炎症反应,对海马造成损伤。