论文部分内容阅读
我国灵芝栽培的现状是菌种以及菌株类型多，栽培方式和培养条件差异大，各地地理环境，气候，温度等也有很大的不同，这些因素是否会影响灵芝子实体在营养成分和活性物质，进而会影响灵芝的质量？因此很有必要建立灵芝活性成分的检测方法，考察这些影响因素对活性成分的影响程度。本文首次针对灵芝中的高分子量活性多糖GLIS建立了HPLC分析方法，运用HPLC对灵芝活性多糖GLIS进行分析测定发现，这个大分子量多糖能与其他成分得到有效分离，方法学考察显示重复性好、精密度高，重现性好，适合灵芝中大分子量多糖的定量分析。通过对不同来源的灵芝进行分析发现仅有部分赤芝含有大分子量的灵芝多糖，其他种如紫芝、树舌、密纹灵芝、松杉灵芝均不含高分子量灵芝多糖。同时对灵芝三萜的HPLC指纹图谱的色谱条件如色谱柱、流动相等进行优化，获得的指纹图谱不仅包括文献中常见的灵芝中的酸性三萜，还包括了灵芝中的中性三萜。对建立的指纹图谱的方法学进行考察发现重复性、精密度和重现性符合分析的要求。运用建立的指纹图谱对不同来源的灵芝进行分析，发现灵芝不同菌种如紫芝、树舌、密纹灵芝、松杉灵芝的指纹图谱相似度非常低，其主要三萜成分的含量差别明显。不同的菌株之间一部分相似度较低，具有明显的差异，也有一部分相似度高，没有明显的差异。同时发现同一个菌株运用不同栽培方式、不同栽培地点、不同年份栽培以及不同采收时间收获的灵芝之间相似度都比较高，说明灵芝中的三萜成分的含量不易因这些条件而发生显著的变化。建立一个核苷类成分尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷的HPLC测定方法，此法简便快速，且稳定性和重复性良好，通过对不同菌株赤芝中四种核苷类成分的含量分析发现存在显著差异，同一菌株的赤芝中四种核苷类成分含量之间存在显著差异。同时还首次建立了灵芝核苷类成分指纹图谱分析的HPLC方法，通过对不同来源的灵芝进行分析发现，随着孢子粉收集后时间的延长，核苷类成分明显降低，这种差异在赤芝119号菌株样品上表现的尤为明显。灵芝不同菌种如紫芝、树舌、密纹灵芝、松杉灵芝的指纹图谱相似度较低，不同菌株的赤芝的指纹图谱相似度也较低；此外栽培时间、栽培地点对灵芝的核苷类成分均有一定的影响。通过新建立的活性多糖（GLIS）的HPLC定量测定方法，灵芝三萜HPLC指纹图谱的色谱条件的优化，以及新建立的HPLC灵芝核苷类成分的指纹图谱对不同来源灵芝中的不同活性成分进行检测，为灵芝质量控制的研究建立基础。