MxIRT1基因表达蛋白定位及转化山定子的研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Hawk8
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本试验以定位研究为切入点,制备了抗MxlRTl蛋白非保守区的多克隆抗体,并以基因枪轰击洋葱表皮细胞,结果表明MxlRTl蛋白定位在质膜上:以对缺铁敏感的苹果基因型山定子叶片为外植体,系统研究叶片分化不定芽的诸多因素,建立稳定、高效的叶片再生体系,在此基础上进行山定子的遗传转化,以期培育抗缺铁的山定子新种质。具体结果如下: 1.利用MxlRTl基因非保守区构建原核表达载体pGEX-MxlRTlK,诱导表达经SDS-PAGE电泳结果表明,可正确表达出约32KD左右的GST-MxlRTlK融和蛋白。通过亲和层析,纯化融和蛋白并制备抗体,酶联免疫(ELISA)分析和Western blotting表明所制备抗体有效。 2.构建瞬时表达载体pMxlRTrl-GFP,通过基因枪轰击洋葱表皮细胞,通过激光共聚焦显微镜(ConfocaL)观察,结果表明,MxlRTl蛋白主要定位在细胞膜上。 3.适宜山定子叶片再生的基本培养基为MS+4mg/L BA+0.5mg/L NAA;暗培养10天效果较好;以山梨醇为碳源、Gelrite为固化剂再生效果较好;山定子近轴面或远轴面接触培养基二者无显著差别;再生率达到97%,单叶片再生芽数达到8.7个/叶。 4.利用根癌农杆菌菌株EHAl05,通过叶盘法将MxlRTI基因转入山定子中,PCR结果表明有5个株系带有目的基因。
其他文献
植物在其生长和发育过程中不可避免地要遭受各种环境胁迫的影响或伤害,长期地进化使植物演化出适应或对付各种胁迫的机制或策略。细胞信息传递是植物实现抗逆的根本基础。植物
草莓是我国最重要浆果之一,产量和栽培面积在浆果中仅次于葡萄。2003年我国草莓面积已达8.2万公顷,产量133.8万t,均居世界首位。随着我国加入WTO,草莓将面临着市场国际化的激