恶性生殖系统肿瘤组织中EPF的表达及EPF-McAb对生殖肿瘤细胞增殖的影响

来源 :广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenzhuqing
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目的:利用早孕因子单克隆抗体(EPF-McAb)检测恶性生殖系统肿瘤组织中早孕因子(EPF)的表达并观察EPF-McAb对膀胱癌细胞EJ、宫颈癌细胞Hela增殖的影响,初步探讨EPF在恶性生殖系统肿瘤组织中的意义及EPF-McAb对恶性生殖系统肿瘤细胞增殖的抑制作用,为EPF-McAb的靶向治疗提供基础。  方法:应用本实验室已鉴定的人胎源性EPF作为抗原免疫BALB/c鼠,通过常规杂交瘤技术制备 EPF-McAb,所制备并纯化的 EPF-McAb经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western Blot,WB)进行鉴定。利用免疫组织化学方法检测膀胱癌、宫颈癌组织中EPF的表达,用IPP软件分析各组织中EPF的IOD值、area值及光密度值;应用台盼蓝染色法和MTS方法检测EPF-McAb处理后膀胱癌细胞EJ和宫颈癌细胞Hela的活力及增殖变化。  结果:成功制备EPF单克隆抗体4E6,纯化后的EPF-McAb经SDS-PAGE在28KD、58KD处可见清晰条带;Western blot显示有一特异性条带,说明 EPF-McAb与EPF有良好的匹配性;免疫组化检测显示,膀胱癌、宫颈癌组织胞浆中有EPF样表达,膀胱癌、宫颈癌组织中EPF的光密度分别是1.778±0.041,1.717±0.063,明显高于膀胱癌旁组织(0.107±0.019)、宫颈癌旁组织(0.175±0.046)及肝癌组织(0.079±0.008)中 EPF的光密度,与癌旁组织相比,差异有统计学意义;同时,与肝癌相比,其差异有显著统计学意义;不同来源的生殖系统肿瘤细胞经EPF-McAb作用72小时后,膀胱癌细胞EJ、宫颈癌细胞hela其活细胞率分别下降了37%、33%;EPF-McAb对这两种生殖系统肿瘤细胞的增殖具有明显抑制作用,当EPF-McAb浓度达到100μg/ml时,膀胱癌细胞EJ及宫颈癌细胞Hela的抑制率分别是11.42±0.15%、10.35±0.24%;当EPF-McAb浓度达到800ug/ml时,细胞的抑制作用越显明显,膀胱癌细胞EJ及宫颈癌细胞Hela的抑制率分别是33.84±0.41%、31.64±0.39%,其抑制率随EPF-McAb浓度的增加而增加,呈剂量效应关系。  结论:成功制备 EPF特异性单克隆抗体4E6,并首次在膀胱癌和宫颈癌这二种生殖系统肿瘤组织中检测到EPF样表达;EPF-McAb能有效抑制膀胱癌细胞EJ、宫颈癌细胞Hela的增殖,并呈剂量效应关系。
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