【摘 要】
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S.algeriensis NRRL B-24137可以产生多种二硫吡咯酮类化合物,这些次级代谢产物对革兰氏阳性和阴性细菌、真菌和酵母都有很好的抑菌活性。B-24137产生二硫吡咯酮类化合物的种
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S.algeriensis NRRL B-24137可以产生多种二硫吡咯酮类化合物,这些次级代谢产物对革兰氏阳性和阴性细菌、真菌和酵母都有很好的抑菌活性。B-24137产生二硫吡咯酮类化合物的种类和产量与培养基密切相关。本研究以B-24137为研究材料,通过建立B-24137的基因组cosmid文库,设计硫氧还原蛋白还原酶基因的特异性引物进行文库筛选,得到12个阳性cosmid。将阳性cosmid分别导入变铅青链霉菌ZX1和白色链霉菌中进行异源表达,但均未成功。从B-24137的基因组序列中我们找到了可能的二硫吡咯酮类化合物的生物合成基因簇。通过生物信息学分析发现该基因簇与Streptomycesclavuligerus中holomycin生物合成基因簇和Streptomyces thioluteus中thiolutin生物合成基因簇具有一定的相似性。B-24137中二硫吡咯酮类化合物生物合成基因簇缺失了编码独立的Cy和TE结构域的基因。这两个基因在holomycin和thiolutin生物合成基因簇中已被证实是必不可少的。B-24137属于糖丝菌属,到目前为止尚无与糖丝菌遗传操作有关的报道。本研究以大肠杆菌S17-1和ET12567(pUZ8002)为供体宿主菌,以整合型质粒pSET152和自主复制型质粒pKC1139作为转移质粒,对B-24137的接合转移方法进行了探索。尝试了不同的接合转移条件,包括培养基、供受比、孢子热激温度、覆盖时间和镁离子浓度等,均未发现有接合子产生。但以所筛选到的cosmid为转移质粒时,成功地获得了接合子。B-24137遗传操作系统的建立将为后期二硫吡咯酮类化合物生物合成基因簇的研究带来便利,对于糖丝菌的遗传学研究也具有重要的意义。
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