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前言青蒿素是从菊科植物黄花蒿中提取的一类倍半萜内酯化合物,以它为原型开发了蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯(artesunate, Art)、双氢青蒿素等衍生物。青蒿素及其衍生物是一类活性很强的抗疟疾药物,主要用于治疗对氯喹耐药的恶性疟疾。近年的研究发现,青蒿素及其衍生物还具有抗肿瘤的效应。青蒿琥酯是青蒿素一个重要衍生物。Efferth等从美国国家癌症研究所中挑选55株人体肿瘤细胞作为研究青蒿琥酯的抗肿瘤活性时显示,最敏感的为人白血病及结肠癌细胞,中度敏感的有黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、中枢神经系统肿瘤及肾癌细胞等,小细胞肺癌的敏感性最差。本实验通过MTT比色法、流式细胞术、透射电镜法研究青蒿琥酯对人卵巢癌细胞株CAOV3细胞的抑制作用及和顺铂对抑制卵巢癌细胞生长的协同作用。通过建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,在体实验证实青蒿琥酯对卵巢癌的抑制作用；通过Western blot(免疫印迹法)检测青蒿琥酯作用后的CAOV3细胞中Survivin和Caspase-3蛋白活性的变化,探讨青蒿琥酯抑制卵巢癌生长的机制。材料与方法一、材料1、药品制备青蒿琥酯临用前用NaHC03溶解再用生理盐水稀释至所需浓度,0-4℃冰箱保存。2、细胞培养人卵巢癌细胞株CAOV3细胞在含10%胎牛血清,100U／ml青霉素,100μg／ml链霉素的DMEM培养基中贴壁生长,于37℃、5%CO2培养箱中传代培养。3、裸鼠BALB/C裸小鼠,4-6周龄,雌性,体重18-22g,购于上海斯莱克实验动物实验中心,饲养于中国医科大学实验动物中心SPF(无特定病原体)级环境的层流架中,经高压灭菌的标准饲料和水供动物自由食用。二、方法1、MTT比色法检测青蒿琥酯对人卵巢癌细胞株CAOV3细胞的体外增殖抑制作用及与顺铂对抑制卵巢癌细胞生长的协同作用；2、透射电镜观察青蒿琥酯对人卵巢癌细胞株CAOV3细胞形态学的影响；3、流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株CAOV3细胞周期的变化和细胞凋亡率；4、建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,研究青蒿琥酯对卵巢癌细胞的抑制作用；5、Western blot法检测青蒿琥酯作用后的卵巢癌裸鼠移植瘤中Survivin和Caspase-3蛋白活性的变化。三、统计学方法实验数据采用SPSS 13.0软件进行t检验及相关分析。P<0.05提示差异具有显著意义。结果1、MTT实验表明青蒿琥酯对人卵巢癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性,随着浓度的增加和时间的延长,抑制率逐渐增加(P＜0.01或P<0.05)。顺铂与青蒿琥酯联合给药对CAOV3细胞的抑制率明显增加(P<0.01)；2、透射电镜可以看出CAOV3细胞形态规则,胞膜完整。青蒿琥酯作用后的CAOV3细胞多个细胞核膜模糊,核内染色质凝聚边集明显,胞膜有破损,呈现凋亡的特征性改变；3、流式细胞仪检测出在青蒿琥酯作用后的CAOV3细胞,在DNA直方图上,G1左侧出现亚二倍体细胞群的峰型即凋亡峰(亚G1峰),且随着浓度的增加凋亡率逐渐增加(P＜0.01),在细胞周期中,随着药物浓度的增加G1+S期细胞减少,G2期细胞明显增加,与对照组相比差异显著(P<0.01),表明青蒿琥酯可以抑制人卵巢癌细胞株CAOV3细胞增殖,诱导其凋亡；4、成功建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,给予三组不同剂量青蒿琥酯药物干预,可以得出青蒿琥酯对移植瘤具有抑制作用,且随着药物浓度的增加抑瘤率逐渐增加,与对照组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。5.Western blot法检测裸鼠移植瘤中Survivin和Caspase-3蛋白的表达,结果显示与对照组比较,各青蒿琥酯给药组Survivin表达均明显下调,而Caspase-3表达均上调。结论1、青蒿琥酯对卵巢癌细胞具有抑制作用；2、青蒿琥酯与传统化疗药顺铂对抑制卵巢癌细胞生长具有协同作用；3、青蒿琥酯对卵巢癌细胞的抑制作用可能通过抑制Survivin表达,激活Caspase-3促进卵巢癌细胞凋亡的途径实现。