背景与目的：1型糖尿病是一以细胞免疫为主的自身免疫性疾病。胰岛β细胞进行性破坏和胰岛素绝对缺乏是该病的特征性改变。普遍认为Th1和Th2细胞及细胞因子的失调在1型糖尿病发病中起重要作用，即Th1细胞和细胞因子促进胰岛β细胞的破坏， Th2细胞和细胞因子则起保护作用。许多研究证明在早期应用β细胞自身抗原胰岛素或B链肽（p9-23）可以诱导免疫耐受，延缓或阻止糖尿病的发生，其机制是通过促进Th1细胞和细胞因子反应向Th2细胞和细胞因子反应转换实现的。β细胞死亡有坏死和凋亡两种方式，凋亡是NOD鼠β细胞死亡的主要方式，NOD鼠存在新生和15周龄β细胞异常凋亡高峰，前一时间点早于胰岛炎初发时间，后一时间点与临床糖尿病始发时间重叠，提示β细胞异常凋亡可展示过量的自身抗原，触发β细胞自身免疫反应，而胰岛T细胞浸润和细胞因子释放又促进β细胞凋亡，导致β细胞进行性减少，最终引发糖尿病发生。FasL/Fas和TNF/TNFR1细胞凋亡通路参与了胰岛β细胞的破坏，Th1细胞因子IL-1、IFN-γ通过上调胰岛β细胞Fas的表达，诱导β细胞凋亡。因此，有理由推测胰岛素和B链肽（p9-23）可能通过影响Th1细胞因子的表达，进而影响β细胞FasL/Fas和TNF/TNFR1凋亡通路，发挥胰岛β细胞的保护效应。为了证明这种假设，设计了本课题。概括如下：背景：1、 1型糖尿病发病过程中，Th1细胞和细胞因子对胰岛β细胞起破坏作用，Th2细胞和细胞因子起保护作用。2、 凋亡是NOD鼠β细胞死亡的主要方式，FasL/Fas和TNF/TNFR1凋亡通路参与β细胞的破坏过程。3、 体外实验表明：Th1细胞因子IL-1β、IFN-γ可以诱导β细胞表达Fas，促进β细胞凋亡。4、 胰岛素和B链肽均可通过介导Th1细胞和细胞因子反应向Th2细胞和细胞因子反应转化而阻止1型糖尿病的发病。 目的：1、 观察NOD鼠自然病程不同时期胰腺Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-10mRNA的表达，及凋亡因子Fas、FasL、TNF-α、TNFR1、CPP32mRNA的表达，明确上述细胞因子和凋亡因子的关系。观察胰岛细胞和炎症细胞Fas、FasL、TNF-α、TNFR1、CPP32蛋白的表达。在NOD鼠新生期（24小时内）、早期（4周龄）应用胰岛素和B链肽，<WP=5>2、 观察其对发病率、胰岛炎程度和胰腺细胞因子IFN-γ和IL-10mRNA的影响，以及FasL/Fas 和TNF/TNFR1凋亡通路的影响。第一部分：目的：观察雌性NOD鼠4、15、30周龄（或发病时）胰腺内细胞因子IFN-γ和IL-10和凋亡因子Fas、FasL、TNF-(、TNFR1、CPP32 mRNA的表达。观察胰岛内胰岛细胞和炎症细胞Fas、FasL、TNF-(、TNFR1、CPP32蛋白的表达水平。方法： 54只雌性NOD鼠随机分为3组，C1、C2、C3组各18只， C1、C2、C3组分别于4周龄，15周龄和发病或30周龄时处死，摘取胰腺，其中6只置于DEPC处理的EP管内，采用RT-PCR的方法，观察细胞因子IFN-(、IL-10，以及凋亡因子Fas，FasL、TNF-(、TNFR1和CPP32 mRNA的表达水平。6只经液氮冷冻后行冰冻切片，HE染色观察胰岛炎。6只经液氮冷冻后行冰冻切片，免疫组化染色，以观察TNF-(、TNFR1、Fas，FasL及CPP32在胰岛细胞及炎症细胞的表达水平。此外，20只雌性NOD鼠于12周龄开始每周检测尿糖，尿糖阳性者测血糖，达糖尿病诊断标准即处死，至观察终点30周时全部处死，以观察NOD鼠糖尿病自然发病率。结果：NOD鼠于17周龄开始发病，至30周龄累积发病率为70%（14/20只）。胰岛炎程度随病程的发展而呈加重趋势，4周龄（C1组）为0-1级胰岛炎、15周龄（C2组）多为2-3级、发病或30周龄（C3组）多为3-4级。胰岛炎积分在C1与C2和C3组比较有明显差异（P1，P2<0.01），C2与C3组之间无明显差异（P3>0.05）。胰腺细胞因子IFN-( mRNA的表达水平，随病程的发展和胰岛炎的加重而增加（P1，P2，P3 <0.05），IL-10 mRNA的表达水平随病程的发展和胰岛炎的加重无显著性变化（P1，P2，P3>0.05）。胰腺FasmRNA的表达水平，C1组最弱，C3组最强，三组间均有显著性差异（P<0.05）。TNF-(、TNFR1、CPP32 mRNA 的表达水平，C2和C3组较C1组明显增强（P1，P2<0.01），C2与C3组比较无显著差异（P3>0.05）。Fas、TNF-(、TNFR1、CPP32 mRNA与IFN-( mRNA 的表达水平呈正相关（相关系数(=0.677，0.763，0.677，0.530），与IL-10mRNA的表达无关((=-0.427，-0.365，-0.457，-0.464)。胰腺FasLmRNA的表达C2和C3组明显高于C1组（P1，P2<0.05），C2与C3组之间无统计学差异（P3>0.05）。FasLmRNA与IFN-( 、IL-10mRNA表达水平无关（(=0.306，-0.390）。免疫组化染色显示胰岛β细胞FasL在C1、C2、C3组均高表达，三组间无显著差异（P1，P2，P3>0.05），胰岛β细胞TNF-(、<WP=6>TNFR1、Fas、CPP32的表达在C1组弱表达，C2、C3组表达增强。C2、C3与C1组之间均有统计学差异（P1，P2<0.05），C2与C3组比较无显著差异（P3>0.05）。C1组几无炎症细胞浸润，C2与C3组之间比较炎症细胞Fas、FasL、TNF-(、TNFR1、CPP32的表达无显著性差异（P >0.05）。结论：根据实验结果可得如下结论：①Th1细胞及细胞因子反应在NOD鼠糖尿病发病中起主导作用。②Th1细胞因子IFN-γ能上调胰腺FasL/Fas和TNF/TNFR1凋亡通路。③FasL/Fa