两种不同光敏剂介导的光动力疗法对变异链球菌杀灭效果的对比研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:patton
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目的:本实验使用临床牙科光固化灯激发两种不同光敏剂产生光动力作用,对比研究这两种光敏剂在不同浓度下介导的光动力疗法对体外培养的变异链球菌株的杀灭效果,旨在为光动力疗法在龋病防治中的临床应用提供一些实验基础。方法:首先,将变异链球菌NCTC10449菌种冻干粉活化,活化后的细菌接种到脑心浸液肉汤中并在二氧化碳培养箱中35℃下培养48 h,待培养液由清澈变为浑浊时说明变异链球菌活化成功。将成功活化的变异链球菌涂布在脑心浸液琼脂培养基上并在二氧化碳培养箱中35℃下培养24 h,然后用标准比浊仪制备0.5麦氏浓度的菌悬液并稀释104倍,此时菌悬液的浓度大约为1×104CFU/ml。其次,称取0.044 g赤藓红溶于5 ml生理盐水中充分震荡,制备成2 mmol/L的赤藓红溶液,然后采取二倍稀释法[1]配制浓度为1 mmol/L、0.5 mmol/L、0.25 mmol/L、0.125 mmol/L、0.0625 mmol/L、0.03125 mmol/L的溶液;称取0.1842 g姜黄素用同样的方法制备成20 mmol/L的姜黄素溶液,然后采用二倍稀释法制备10 mmol/L、5mmol/L、2.5 mmol/L、1.25 mmol/L、0.625 mmol/L、0.132 mmol/L的溶液。母液与稀释后的溶液均避光保存。将各个浓度的溶液与菌悬液1:1混合,此时混合液中赤藓红的浓度分别为1 mmol/L、0.5 mmol/L、0.25 mmol/L、0.125 mmol/L、0.0625mmol/L、0.03125 mmol/L、0.015625 mmol/L,分别记为A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7;混合液中姜黄素的浓度分别为10 mmol/L、5 mmol/L、2.5 mmol/L、1.25mmol/L、0.625 mmol/L、0.3125 mmol/L、0.1563 mmol/L,分别记为B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7。最后,将14种浓度(A1-A7,B1-B7)的混合液作为光动力组分别用牙科光固化灯照射40 s,用相同对应浓度的混合液作为光敏剂组不进行光照,而不加光敏剂的菌液与等体积生理盐水混合(A0)作为光照对照组用牙科光固化灯照射40 s,不加光敏剂的菌液与等体积生理盐水混合(A0’)作为空白对照组不进行光照。用移液器取40μl混合液置于脑心浸液琼脂培养基中央,用接种环涂布均匀。将所有实验组和对照组(共计30组)转移至二氧化碳培养箱中35℃下培养24 h,取出后观察并计数CFU值。结果:1.赤藓红和姜黄素介导的光动力疗法均对体外培养的标准变异链球菌有杀灭作用。当赤藓红浓度大于0.25 mmol/L,姜黄素浓度大于2.5 mmol/L时几乎可以杀灭所有的变异链球菌。2.赤藓红浓度大于0.015625 mmol/L时,光动力组的CFU值均小于对应浓度光敏剂组。当浓度大于0.03125 mmol/L时,相同浓度赤藓红介导的光动力组和单纯使用赤藓红的光敏剂组对细菌的杀灭作用的CFU值差异均有统计学意义(P值均小于0.05),但浓度为0.015625 mmol/L时两组CFU值差异均无统计学意义(P=0.314)。3.姜黄素浓度大于0.156 mmol/L时,光动力组的CFU值均小于对应浓度光敏剂组。当浓度大于0.3125 mmol/L时,相同浓度姜黄素介导的光动力组和单纯使用姜黄素的光敏剂组对细菌的杀灭作用的CFU值差异均有统计学意义(P值均<0.001),但浓度为0.156 mmol/L时两组CFU值差异均无统计学意义(P=0.760)4.光照对照组和空白对照组相比无统计学意义(P=0.914)。结论:1.使用牙科光固化灯和赤藓红、姜黄素两种光敏剂介导的光动力疗法在实验室条件下均可以对变异链球菌有明显的杀灭作用,且这种效应在一定范围内与光敏剂的浓度呈正相关,当光敏剂浓度过低时,光动力效应就会消失,与单独使用光敏剂没有区别;当光敏剂浓度升高到一定值时几乎可以杀灭所有的细菌。2.单独使用临床牙科光固化灯照射或单独使用光敏剂对体外培养的变异链球菌没有灭菌效果。3.光动力疗法对变异链球菌达到同样的杀菌效果时,赤藓红所需要的浓度要低于姜黄素所需要的浓度。
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