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目的:采用反义技术封闭survivin在肝门部胆管癌细胞FRH-0201中的表达,探讨survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide targeting survivinsurvivin ASODN)对肝门部胆管癌细胞增殖及凋亡的影响;观察survivin ASODN对凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响。方法:本实验分两部分进行。第一部分:survivin ASODN诱导肝门部胆管癌细胞凋亡的研究。脂质体介导survivin ASODN、survivin SODN及RPM1640培养液作为空白对照组转染肝门部胆管癌细胞FRH-0201;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR、Western blot法检测survivin mRNA及蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。第二部分:Western blot法检测靶向抑制survivin表达对肝门部胆管癌细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响。结果:1、survivin ASODN诱导肝门部胆管癌细胞凋亡的研究。(1)倒置相差显微镜观察细胞形态学变化:ASODN转染组细胞出现皱缩、变圆、脱落;SODN转染组细胞及对照组细胞呈长梭形生长,细胞轮廓清楚;(2)survivin基因表达状况:ASODN转染组细胞survivin基因表达明显低于对照组细胞及SODN转染组(0.51±0.03 vs 0.82±0.02,0.79±0.04,P＜0.05),SODN转染组细胞survivin基因表达与对照组细胞相比无明显差异性(0.79±0.04 vs 0.82±0.02,P＞0.05);(3)Survivin蛋白表达状况:ASODN转染组细胞Survivin蛋白表达明显低于对照组细胞及SODN转染组(1.82±0.16 vs 3.08±0.38,2.81±0.11,P＜0.05),SODN转染组细胞Survivin蛋白表达与对照组细胞相比无明显差异性(2.81±0.11 vs 3.08±0.38,P＞0.05);(4)流式细胞仪检测细胞的凋亡率:ASODN转染组细胞凋亡率明显高于对照组及SODN转染组细胞(11.50±1.49%vs 0.39±0.08%,0.98±0.07%,P＜0.05),SODN转染组细胞凋亡率与对照组细胞相比无明显差异性(0.98±0.07%vs 0.39±0.08%,P＞0.05)。2、Western blot法检测靶向抑制survivin表达对肝门部胆管癌细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响:(1)Caspase-3蛋白表达状况:survivinASODN转染组细胞Caspase-3蛋白表达明显高于对照组细胞及SODN转染组(1.25±0.22 vs 0.51±0.19,0.59±0.17,P＜0.05),SODN转染组细胞Caspase-3蛋白表达与对照组细胞相比无明显差异性(0.59±0.17 vs 0.51±0.19,P＞0.05);(2)Bax蛋白表达状况:survivin ASODN转染组细胞Bax蛋白表达明显高于对照组细胞及SODN转染组(0.49±0.15 vs 0.21±0.10,0.23±0.08,P＜0.05),SODN转染组细胞Bax蛋白表达与对照组细胞相比无明显差异性(0.23±0.08 vs 0.21±0.10,P＞0.05);(3)Bcl-2蛋白表达状况:survivin ASODN转染组细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组细胞及SODN转染组(0.17±0.05 vs0.88±0.11,0.76±0.08,P＜0.05),SODN转染组细胞Bcl-2蛋白表达与对照组细胞相比无明显差异性(0.76±0.08 vs 0.88±0.11,P＞0.05);结论:1、survivin ASODN能有效下调survivin基因表达,诱导肝门部胆管癌细胞凋亡。2、survivin ASODN可能通过上调凋亡终末效应蛋白Caspase-3和凋亡促进蛋白Bax的表达,抑制凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,诱导肝门部胆管癌细胞凋亡。