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本研究采用高脂小鼠模型对毛蚶CGAG、海蜇CGAG、马氏珠母贝CGAG进行了降血脂活性的比较。结果显示:毛蚶CGAG、海蜇GAG具有降低高脂模型小鼠TC、LDL-C,及升高其HDL-C的作用,对于降低TG作用不明显;马氏珠母贝CGAG具有降低高脂模型小鼠TC、LDL-C的功能,对于降低TG及升高HDL-C作用不明显。其中,在降低高脂模型小鼠TC、LDL-C方面,以毛蚶效果最佳,海蜇次之,马氏珠母贝最差;在升高HDL-C方面,毛蚶组与海蜇组效果相当。给药前后相比,毛蚶组TC、LDL-C的下降率以及HDL-C的上升率均高于马氏珠母贝组和海蜇组,因此本研究选用鲜毛蚶全脏器为原料,对毛蚶GAG提取工艺、定性检测及降血脂功能进行了进一步研究。
首先以提取物中总氨基己糖含量和氨基态氮为指标,对酶解毛蚶工艺流程进行了比较,优选出双酶水解的最佳条件:同时加0.8%的中性枯草杆菌酶和1.5%的木瓜蛋白酶,50℃,pH7.0,水解8h。然后再对提取的粗多糖进行精制、纯化,分别得到含杂质很少的毛蚶GAG精制品(毛蚶GAG1)、毛蚶GAG纯化品(包括三个主要级份:毛蚶GAG2-2、毛蚶GAG2-3-1、毛蚶GAG2-3-2),并对其进行了定性检测。毛蚶GAG1的中性糖、总氨基己糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、糖醛酸、硫酸基的含量分别为17.6%、60.2%、47.5%、12.7%、9.1%、2.6%;毛蚶GAG2-2的中性糖、总氨基己糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、己糖醛酸、硫酸基的含量分别为11.4%、72.5%、44.2%、28.3%、11.7%、3.2%;毛蚶GAG2-3-1主要以氨基半乳糖、氨基葡萄糖为主,中性糖、总氨基己糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、己糖醛酸、硫酸基含量分别8.3%、84.3%、58.4%、25.9%、7.8%、3.7%;毛蚶GAG2-3-2主要以氨基半乳糖、氨基葡萄糖为主,中性糖、总氨基己糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、己糖醛酸、硫酸基的含量分别为7.2%、87.8%、61.4%、26.4%、6.4%、4.5%。
再以毛蚶GAG1进行了降血脂小鼠实验,动物实验显示:毛蚶GAG1-L、毛蚶GAG1-M、GAG1-H组相对HFD组小鼠血清的TG、TC、LDL-C、AI水平分别下降了8.36%、15.21%、27.67%、29.8%;15.32%、27.61%、52.31%、61.8%;19.30%、33.18%、60.38%、69.1%,同时HDL-C水平分别提高了6.11%、23.66%、35.88%。与HFD、ND相比,毛蚶GAG1-M、GAG1-H组的TC、LDL-C下降水平及其HDL-C的上升水平均达极显著水平(P<0.01)。提示毛蚶GAG1高、中剂量均能有效地抑制高脂饮食小鼠血脂的升高,并能使血脂以上各项指标降至正常水平。根据降脂功能性食品评价原则,可以得出毛蚶GAG1具有降血脂功能。毛蚶GAG1-M、GAG1-H组可明显改善高脂饮食小鼠肝脏组织学的病变程度,表现为用药后肝小叶和肝血窦结构清晰,细胞排列整齐,肝细胞内无明显脂滴空泡,说明毛蚶多糖具有保护肝脏的作用。
最后对毛蚶GAG降血脂机理进行了初步探索,用纯化得到的毛蚶多糖进行了细胞内胆固醇合成抑制实验,结果显示毛蚶GAG2-3-2、GAG2-3-1可以保护CHO细胞免受两性霉素B损伤,用有一定量效关系。说明了毛蚶GAG抑制内源性胆固醇合成的作用。