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埃博拉病毒病（Ebola virus disease,EVD）是由埃博拉病毒（Ebola virus,EBOV）引起的一种人和灵长类动物高致病率和高死亡率的急性、烈性传染病。该病自1976年首次在非洲刚果共和国（原扎伊尔）被发现,到2014年3月在西非爆发,已在几内亚、尼日利亚、塞拉利昂等多个国家蔓延,本次疫情的死亡人数超过1976年首次爆发以来40年的总死亡人数,被认定为“史上最强”。据世界卫生组织（World Health Organization,WHO）报道,截止到2016年6月10日全球已确诊及疑似感染病例28616例,其中死亡人数达11310例。2018年埃博拉疫情再次在非洲中部国家刚果金暴发流行,截止到2019年3月5日,刚果民主共和国第10轮埃博拉疫情共报告病例907例,其中死亡569例。由于该病的高致病率和高死亡率,给发病的国家及地区带来严重的经济损失和人员伤亡。虽然我国尚无EBOV感染病例的相关报道,但随着国际间贸易频繁往来,经济贸易全球化,我国也存在该病入侵的风险,这对我国已构成严重的潜在威胁。目前,国内外仍无上市的治疗及预防EVD的有效药物,因此为防止该病入侵,我们必须加强对该病的进出境监测,急需建立针对EBOV抗原、抗体的简便、快速、特异的检测方法。为此,本研究建立了EBOV正向间接血凝抗体检测方法和EBOV反向间接血凝抗原检测方法,以期为EVD疫情的监测、流行病学调查、快速诊断、抗体水平的检测和疫苗免疫后的效果评价提供技术储备,以备不时之需。1.EBOV正向间接血凝抗体检测方法的建立及初步应用:以纯化后的EBOV糖蛋白（GP）作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,建立EBOV正向间接血凝抗体检测方法。当抗原致敏红细胞的浓度为160μg/mL时,在4°C条件下作用1h为该方法的最佳反应条件,且该方法可特异性检测EBOV抗体,与马尔堡病毒、西尼罗病毒、裂谷热病毒等的阳性血清均不发生反应。用该方法对EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F（ab’）2等20份样品进行检测,同时对EBOV VLPs疫苗不同免疫时间收获的马血清进行检测,并将检测结果与假病毒中和试验检测结果进行比较。结果表明,该方法与假病毒中和试验检测结果总体趋势一致。综上所述,本研究成功建立了EBOV抗体正向间接血凝检测方法,该方法无需特殊的仪器和设备、安全、简便、快捷,为EBOV疫苗免疫后的效果评价提供了又一新的检测方法。2.EBOV反向间接血凝抗原检测方法的建立及初步应用:本研究将EBOV病毒样颗粒（EBOV VLPs）免疫马匹获得的阳性血清,首先用饱和硫酸铵沉淀法初纯血清中的IgG,后经Protien G柱亲和层析法精纯IgG,用精纯后的IgG致敏醛化的绵羊红细胞,建立反向间接血凝抗原检测方法,并对该方法进行最佳反应条件的优化,当抗体致敏红细胞的浓度为40μg/mL时,在37°C条件下作用1 h为该方法的最佳反应条件。用该方法对不同批次制得的已知病毒滴度的EBOV假病毒进行检测。结果显示,EBOV假病毒滴度的高低与血凝结果总体趋势一致,即假病毒的病毒滴度高,相对血凝检测结果高;反之,假病毒滴度较低时,相对应的血凝检测结果偏低。本研究成功建立EBOV反向间接血凝抗原检测方法,该方法简单、快速且不需要特殊的仪器设备,1 h内便可报告检测结果,在普通实验室中便可进行操作,可用于EVD抗原的快速检测,对EVD疾病的监测、快速诊断等具有一定的实际应用价值。