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肿瘤的靶向治疗是目前研究的热门领域之一,本课题旨在建立一种高度精准的靶向给药系统HER2-2-ME-BSANPs,即以牛血清白蛋白(BSA)为载体,抗HER2单克隆抗体为靶头,将“弹头”药物2-甲氧基雌二醇递送至特定肿瘤部位,增加药物在肿瘤部位的蓄积及摄取,缓慢释放药物,有效提高其抗肿瘤效果,减小药物的毒副作用。本课题主要研究内容可分为三个部分:第一部分,HER2-2-ME-BSANPs的制备及相关制剂学表征。采用去溶剂化法制备2-甲氧基雌二醇白蛋白纳米粒(2-ME-BSANPs),再利用异型双功能交联剂SPDP将抗HER2单抗与2-ME-BSANPs进行偶联反应,制备抗人乳腺癌特异性纳米粒HER2-2-ME-BSANPs。通过SDS-PAGE电泳、凝集试验和免疫荧光实验,证实抗HER2单抗与2-ME-BSANPs偶联成功,该给药系统具有高度免疫活性及特异性;DTT法检测抗HER2单抗与2-ME-BSANPs偶联比为36.28%,可实现高效靶向作用;HER2-2-ME-BSANPs平均粒径和电位分别为(221.5±2.1)nm和(-25.59±0.69)mV,纳米粒大小均匀、稳定;HPLC检测HER2-2-ME-BSANPs的包封率与载药量分别为(89.15±3.80)%和(8.31±2.50)%,增加了2-ME的溶解性、提高了其生物利用度;制剂HER2-2-ME-BSANPs的体外释药结果表明,相比于2-ME原料药,HER2-2-ME-BSANPs具有缓释性,延长了2-ME的半衰期。第二部分,HER2-2-ME-BSANPs的体外细胞毒性及靶向性研究。以人乳腺癌细胞SK-BR-3(HER2受体阳性表达,HER2+)和MCF-7(HER2受体阴性表达,HER2-)为模型细胞,考察HER2-2-ME-BSANPs的体外抗肿瘤活性及靶向性。MTT结果显示HER2-2-ME-BSANPs对SK-BR-3细胞的抑制作用高于MCF-7细胞,且对该两种肿瘤细胞的抑制均呈现浓度与时间依赖性,与游离药物相比,抗肿瘤药效具有显著性差异;细胞摄取结果表明HER2-2-ME-BSANPs在抗HER2单抗的介导作用下,可快速、高效进入HER2受体阳性表达的肿瘤细胞内部;细胞周期结果显示HER2-2-ME-BSANPs将两种肿瘤细胞均阻滞于G2/M期,具有细胞周期阻滞作用,且未改变2-ME的阻滞周期;细胞凋亡及自噬结果证明HER2-2-ME-BSANPs可通过诱导细胞凋亡及细胞自噬对SK-BR-3细胞和MCF-7细胞的增殖产生抑制作用。靶向给药系统HER2-2-ME-BSANPs可将药物精准、高效地导向于特定肿瘤细胞,在体外具有良好的抗肿瘤活性及靶向性。第三部分,HER2-2-ME-BSANPs的药代动力学、药效学及体内靶向性研究。以SD大鼠为动物模型,研究靶向制剂HER2-2-ME-BSANPs体内药动学特征。结果显示,相比于2-ME原料药,HER2-2-ME-BSANPs在体内的消除半衰期及平均滞留时间显著延长,药物的血浆清除速率减小,AUC明显增加,表明靶向制剂HER2-2-ME-BSANPs具有缓释性,使药物在肿瘤部位缓慢释放,延长有效药物浓度时间,持久发挥肿瘤治疗作用,同时可改善药物2-ME生物利用度低及半衰期短等缺点。选用BALB/c裸鼠为模型动物,人乳腺癌细胞SK-BR-3(HER2+)和MCF-7(HER2-)细胞为模型细胞,构建荷瘤鼠模型。采用经典药理学方法考察HER2-2-ME-BSANPs的体内抗肿瘤活性,结果显示HER2-2-ME-BSANPs对HER2受体阳性表达的乳腺癌抑制效果明显优于HER2受体阴性表达的乳腺癌,表明相比2-ME和2-ME-BSANPs,HER2-2-ME-BSANPs在体内具有高效的抗肿瘤活性。同时,采用活体成像技术和荧光染料DIR标记该给药系统,观察其在小鼠体内各组织的分布特征,并解剖出各脏器,拍照,观察药物载体的肿瘤靶向特征,结果显示该靶向给药系统在HER2受体阳性表达的乳腺癌的荧光信号强于HER2受体阴性表达的乳腺癌,且其在肝脏中较少蓄积,表明该靶向给药系统可浓集于特定肿瘤部位,增加药物在肿瘤组织的摄取,发挥良好的抗肿瘤效果。