空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是家禽、家畜及某些鸟、兽肠道内的正常寄居菌,消费者食用被污染的食品后可造成食物中毒。本研究通过对全国食品中空肠弯曲菌的污染状况和水平进行调查,同时通过ERIC-PCR(肠杆菌基因间共有重复序列-聚合酶链式反应)的分型方法构建了空肠弯曲菌分离株的指纹图谱,旨在了解其内在关联,为预防和控制食品中空肠弯曲菌的污染提供科学依据。目前空肠弯曲菌的污染调查都局限于单个省市的定性研究,无法全面反映空肠弯曲菌在食品中的污染情况和污染水平。为了解空肠弯曲菌在全国食品中的污染状况,我们于2011年11月～2013年1月运用九管法对全国代表性城市(深圳、韶关、汕头、湛江、河源、海口、三亚、北海、南宁、福州、厦门、兰州、哈尔滨、西安、太原、北京、济南、合肥、南昌、成都、武汉、昆明、上海)的市售生鲜禽畜肉及其制品、生食蔬菜、熟食、水产品、速冻食品、奶制品、食用菌7大类1161份食品样品进行空肠弯曲菌污染的调查。根据生化和多重PCR鉴定结果,获得空肠弯曲菌19株,显示19份阳性样品全部来自于肉与肉制品中的生鲜禽肉类,检出率为1.64%(19/1161),而其余样品均未分离到空肠弯曲菌；其中肉与肉制品的检出率达6.75%,MPN平均值达8.5,生鲜禽肉类样品是空肠弯曲菌的主要污染对象,加强生鲜禽肉类空肠弯曲菌的监控措施至关重要。国内外研究显示,ERIC-PCR作为一种分子分型手段有着不逊于随机扩增多态性(RAPD)分型、制酶长度多态性分型(RFLP)、脉冲场电泳(PFGE)分型、多位点序列分型(MLST)等其他分型技术的分辨力,而且其稳定性好、操作简单、成本低廉。本研究以ERIC核心序列设计引物,运用L16(54)正交试验,对Mg2+、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素在较大范围水平内进行反应体系条件摸索,得到一个初步的优化体系。在此基础之上对这3个因素(除了引物)和模板浓度、退火温度进一步小范围水平内的微调优化,得到最终的优化体系。最后以优化的ERIC-PCR方法对本实验室分离到的24株空肠弯曲菌菌株分型；同时根据API Campy生化反应结果进行生化分型,比较ERIC-PCR分子分型方法和生化分型方法。优化的反应体系中Mg2+和dNTPs浓度分别为3.0mmol/L、0.25mmol/L, TaqDNA聚合酶量为1.5U/25μL,模板用量在24-120ng/25μL之间,退火温度为35℃,优化的ERIC-PCR方法将24株空肠弯曲菌分菌株分为4簇22个基因型,该方法的分辨系数为0.920,显示了较好的分辨力。生化分型将24株空肠弯曲菌分菌株分为4簇19个生化型,显示了菌株基因的多样性。所建立的ERIC-PCR方法具有较好的稳定性及较高的分辨力,比生化分型能更好的体现菌株的遗传多样性,适用于空肠弯曲菌的分型和溯源。本研究在进行全国食品中空肠弯曲菌的污染调查后,建立起空肠弯曲菌的ERIC-PCR分子分型方法和进行了分离株的分子分型,初步掌握了食品中空肠弯曲菌的污染分布规律,为建立空肠弯曲菌的溯源图谱库打下了良好的基础。本研究对空肠弯曲菌分离株的12种毒力相关基因的分布情况进行了分析,并采用前期建立的ERIC-PCR方法对全国食品中的空肠弯曲菌分离株进行分子分型。毒力相关基因分布情况分析实验显示,毒力基因cadF、racR、flaA、cdtA、cdtB、cdtC、dnaJ、 ciaB、imaA的携带率都超过50%,pldA和wlaN的携带率均为10%,而virBll的携带率为0。ERIC-PCR分析结果显示19株空肠弯曲菌可分为3簇10个基因型,在簇A中包含15个菌株,相似性在61%-100%。簇B和簇C中分别包含2个菌株,来源于不同地区不同样品,相似性在67%-80%之间,表明这4株菌亲缘关系较远。