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由P. digitatum引起柑橘绿霉病是最重要的柑橘产后病害。采后药剂处理依然是柑橘绿霉病防治的最重要手段。苯基毗咯类(phenylpyrroles)杀菌剂氟咯菌腈(fludioxonil)最近在美国登记使用在柑橘产后病害防治上,但其作用机制尚不明确,从模式真菌和一些植物病原真菌的相关研究结果看,氟咯菌腈极有可能通过干扰影响病菌甘油合成的双组份(two-component system)和高渗透压甘油途径(high osmolarity glycerol response pathway, Hogl pathway)。因此我们选择柑橘绿霉菌Hogl信号传递途径的关键性元件MAPK激酶(mitogen activated protein kinase) PdOs2基因进行功能分析。并对该信号途径中的双组分组氨酸激酶NikA基因、MAPKKK激酶Ssk2、转录调控因子AtfA基因进行了基因克隆和缺失突变体构建工作。通过兼并性引物PCR扩增并结合Tail-PCR技术从柑橘绿霉菌中获得了与脉胞菌(Neurospora crassa) MAPK基因Os2同源的MAPK基因序列,称之为PdOs2。该序列包括其上游启动区和下游终止区在内的4247bp核苷酸。通过cDNA扩增测序和DNAman软件分析,发现该序列包含一个长度为1604 bp开放阅读框(ORF),9个外显子和8个内含子。内显子长度分别为86 bp、73 bp、52 bp、55 bp、54 bp、60 bp、60 bp和57 bp,分别位于在56-143bp,190-264 bp,393-446 bp,489-545 bp,644-699bp,1055-1116 bp,1194-1255bp,1438-1496 bp之间。预测编码368aa,PI为5.16,分子量为42 KD的蛋白。对推导的PdOs2序列比对搜索表明,PdOs2与灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)的BcSAK1,稻瘟菌(Magnaporthe grisea)的Osml,以及Alternaria alternate的AaHOG1分别由有90%、92%和91%的一致性。典型的Os2蛋白保守性结构域TGY存在于173-175位氨基酸上。为了研究PdOs2基因的功能,我们通过农杆菌介导的遗传转化体系构建了PdOs2的缺失突变体；比较了缺失突变体在生长,产孢,渗透压敏感新和杀菌剂氟咯菌腈及异菌脲抗性方面与野生型菌株的差异。结果显示菌丝生长轻微下降,同时产孢能力受到严重损伤,缺失突变菌株对渗透压的敏感性增强。此外病原菌致病性也有轻微的降低。这些结果表明PdOs2基因参与病原菌生长,分化渗透压调节。杀菌剂氟咯菌腈可能通过激活真菌Hogl信号途径来发挥杀菌效果。此外,我们还克隆了柑橘绿霉菌双组份Hogl途径中的关键性基因：组氨酸激酶基因NikA、MAPKK激酶Ssk2基因、转录调控因子AtfA基因的全长序列。并构建获得了它们的缺失突变体,为进一步研究该信号传递途径奠定了一定的基础。