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目的:本研究以亚慢性氯乙烯(VCM,vinyl chloride monomer)静式吸入染毒、高脂饮食以及二者联合对小鼠进行为期13周的暴露处理,检测氧化应激、ERS相关指标以及肠道菌群的改变,探讨高脂饮食、VCM亚慢性染毒以及二者联合对小鼠肝脂肪变性的影响及作用机制。方法:48只雄性SPF级雄性C57BL/6J小鼠按照体重随机分为6组:分别为对照组和高脂饮食组、低剂量VCM暴露组(160mg/m~3)、高剂量VCM暴露组(800mg/m~3)和低剂量联合高脂饮食组(160mg/m~3)、高剂量联合高脂饮食组(800mg/m~3),每组8只。采用静式吸入的方式来进行染毒,5次/周,2h/次。13周后,进行麻醉后处死,收集小鼠各项生物材料。检测血清中ALT和AST水平评价肝脏损伤,检测血清中极低密度脂蛋白VLDL含量评价肝脏脂质转运的改变,血清、肝脏中TG和TC水平来反映肝脏脂肪的代谢。部分肝脏进行HE染色和油红O染色切片。同时测定肝脏细胞色素P450酶系酶CYP2E1的含量,MDA、GSH、SOD、GSH-Px水平来评价氧化应激水平。RT-PCR检测肝组织中ERS标志GRP-78、SREBP-1、ACC和FAS mRNA相对表达水平和Western-Blot来检测蛋白相对表达水平。通过16S rDNA扩增子测序技术分析各组小鼠肠道菌群的组成结构以及多样性的变化。统计分析用SPSS24.0软件,ANOVA单因素方差分析以及LSD法进行不同组间差异的比较,结合析因设计分析方法分析两种因素之间的交互作用,检验水准为0.05。结果:1、高脂饮食可诱导小鼠肝脂肪变性、肝细胞损伤等病理变化,HE染色显示出现散在的脂肪空泡样变性,油红O染色显示肝组织出现脂肪红染区域,氯乙烯染毒与高脂饮食联合所致的肝脏病理改变则更为严重。2、血清及肝脏生化改变:与对照组相比,高脂组、VCM低剂量联合组和VCM高剂量联合组小鼠血清中ALT、AST、TG、TC水平升高,均具有统计学差异(P<0.05)。高剂量VCM暴露组血清ALT含量水平高于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。VCM低剂量联合组的血清TG、TC含量高于单独氯乙烯低剂量暴露组,VCM高剂量联合组血清TG、TC和肝脏TC含量高于氯乙烯高剂量暴露组,差异具有统计学意义(P<0.05)。血清中VLDL水平在各组间差异无统计学意义。3、CYP2E1及氧化应激指标改变:各组小鼠CYP2E1含量水平较对照组均有上调,VCM低剂量联合组高于高脂组,VCM高剂量联合组高于高脂组和高剂量VCM暴露组,且具有统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,两个联合组小鼠肝脏MDA含量升高,SOD水平降低(P<0.05),且VCM高剂量联合组MDA含量高于高脂组与高剂量VCM暴露组,SOD水平低于高脂组与高剂量VCM暴露组(P<0.05)。高剂量VCM暴露组和两个联合组的小鼠肝脏GSH含量均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。各组小鼠肝脏GSH-Px水平无统计学差异(P>0.05)。4、内质网应激ERS相关指标改变:高脂组、高剂量VCM暴露组和VCM高剂量联合组GRP-78 mRNA表达量均高于对照组(P<0.05),但只有VCM高剂量联合组的蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。VCM高剂量联合组SREBP-1基因的mRNA表达量与蛋白相对表达量一致,均要高于对照组(P<0.05),同时VCM高剂量联合组SREBP-1蛋白相对表达量也要高于高脂组,具有统计学差异(P<0.05)。VCM高剂量联合组FAS基因mRNA表达量与蛋白相对表达量一致,均要高于对照组及单一暴露组(高脂组、低剂量VCM暴露组和高剂量VCM暴露组),具有统计学差异(P<0.05),VCM高剂量联合组FAS基因蛋白相对表达量也要高于对照组及单一暴露组(高脂组、低剂量VCM暴露组和高剂量VCM暴露组),具有统计学差异(P<0.05)。各组ACC基因以及蛋白的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。5、与对照组相比,各处理组的肠道菌群的组成与多样性均有不同程度的变化,在优势菌群的分布上,与对照组相比,各组小鼠厚壁菌(Firmicutes)均有不同程度的占比增加,拟杆菌(Bacteroidetes)等门均有不同程度的占比降低。高脂组可检测到的肠道微生物种类低于VCM高剂量联合组和VCM低剂量暴露组,差异具有统计学意义(P<0.05)。VCM低剂量联合组低于对照组、VCM高剂量联合组和低剂量VCM暴露组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,所有处理组的肠道微生物组成与多样性差异都比较大,然而,高脂组与VCM低剂量联合组的物种组成非常相似,并且组内的差异很小。结论:1、高脂饮食可诱导小鼠血脂和肝脂升高,肝脏脂肪变性,肝细胞损伤,单独的低浓度的氯乙烯暴露尚未出现可检测的肝损伤,但是氯乙烯与高脂饮食联合组的肝脏脂肪变性以及肝细胞损伤程度要高于单一因素暴露组(高脂组与VCM低、高剂量暴露组),氯乙烯暴露能增强高脂饮食所致的肝脏损伤。2、氯乙烯与高脂饮食均可引起CYP2E1含量的增加,VCM低剂量联合与VCM高剂量联合均可引起氧化应激指标的改变,VCM高剂量联合高脂饮食可以引起氧化应激及ERS,使固醇调节元件结合蛋白SREBP-1的表达以及脂肪酸合成酶FAS mRNA及蛋白表达量增加,这可能会导致肝脏中脂肪合成增多。3、高脂饮食与氯乙烯吸入染毒均可诱导小鼠肠道菌群失调,在优势菌群的分布上,与对照组相比,每组的厚壁菌门(Firmicutes)均有不同程度的增加,拟杆菌门(Bacteroidetes)均有不同程度的降低。低剂量VCM联合组与高脂组的肠道微生物组成并无显著差异,但是高剂量VCM联合组与低剂量VCM联合组相比较会产生不同的肠道微生物组成结构变化,高脂饮食、单独氯乙烯暴露染毒和二者联合均可导致不同程度的肠道菌群失调。