AP2/EREBP家族MfERF049基因对提高豆科植物生物胁迫和非生物胁迫抗性的功能分析

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:lwllwl200315
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黄花苜蓿(Medicago falcata L.),豆科苜蓿属草本植物,是一种分布范围极广、抗逆能力很强、形态多样、品质优良、营养价值丰富的豆科牧草。为了研究黄花苜蓿中既能响应生物胁迫,又能响应抗非生物胁迫的基因,本研究将黄花苜蓿的MfERF049基因转化至截形苜蓿A17(Medicago truncatula A17)的根中对该基因在提高植物抗逆性方面的功能进行了分析。实验室前期对野生黄花苜蓿进行盐和低温胁迫处理,并在其转录组测序结果中筛选出表达具有显著差异的基因。在此基础之上,本研究经过生物信息学分析发现,其中的c70245-g2序列与截形苜蓿A17中的MtDREB2A为同源基因。具体研究方法是:首先以NCBI网站上报道的MtDREB2A基因序列为模板设计特异引物,分析目的基因MfERF049在经过不同条件胁迫的野生型黄花苜蓿中的表达模式。之后利用同源基因克隆法得到了黄花苜蓿的MfERF049基因,并将其构建到表达载体pKGWRR中,利用毛根转化法将其转化至截形苜蓿A17的根部,对转基因根的表型(根长、根鲜重)统计结果、生理指标(POS、SOS、MDA、PRO)检测结果、目的基因和其下游基因的表达水平进行了分析。通过胁迫实验证明该基因对高盐、干旱、高温、低温、ABA和苜蓿中华根瘤菌这6种胁迫都有应答,尤其是高盐、干旱和低温胁迫,这与该基因在其他物种中的研究结果相吻合。另外,MfERF049基因可以分别对其下游基因Lea14和Cas15A起到正调控和负调控的作用。本研究利用同源克隆法获得野生黄花苜蓿MfERF049基因的序列,并初步探究了该基因在植物抗逆性上发挥的功能,加深了对AP2/EREBP家族的认识。
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