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目的:许多研究表明造血干细胞移植后的移植物抗宿主病的发生与树突状细胞的免疫重建有着明显的相关性,然而关于供体树突状细胞各亚群的免疫重建异常的机制仍没有明确的答案,树突状细胞的产生与发育主要来源于骨髓中的造血干祖细胞如多能干细胞(MPP),树突状细胞祖细胞(CDP)。关于这些干祖细胞在移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)发生发展过程中的改变以及其可能机制的研究仍然较少,本研究将通过造血干细胞移植后外周血以及骨髓临床样本中树突状细胞以及树突状细胞祖细胞的比例和数量的检测来探讨造血干细胞移植后儿童的树突状细胞免疫重建的情况以及其与移植物抗宿主病的严重程度的相关性。通过体外培养造血干细胞,建立造血干细胞向树突状细胞分化的体外培养系统。并通过体外实验探导致树突状细胞免疫重建异常的可能分子机制。方法:1.使用流式细胞仪检测粒细胞植入时造血干细胞移植后患者外周血中DC以及其亚群的比例以及数目的情况。2.使用流式细胞仪检测造血干细胞移植后1个月的患者骨髓中造血干祖细胞的比例和数量。3.使用流式细胞仪检测造血干祖细胞中Dot1L的功能产物H3k79me2的表达水平。4.使用流式细胞仪检测使用不同细胞因子组合体外培养14后的粒细胞,单核细胞,树突状细胞的比例及数量。5.向体外培养系统中添加Dot1L抑制剂SGC0946,检测抑制剂组以及对照组体外分化培养第8天,第12天,第16天时检测粒细胞,单核细胞,树突状细胞的比例及数量。6.使用分选式流式细胞仪分选抑制剂组以及对照组中体外培养14天后的pDC以及CD1c+DC,将分选后的树突状细胞与CD4+T细胞进行共培养,使用流式细胞仪检测其分泌细胞因子的情况。7.使用流式细胞仪检测分化培养后CD1c+DC、pDC表达共刺激分子的情况。8.使用定量PCR法检测培养分化后的CD1c+DC、pDC分泌细胞因子的基因的表达情况。9.使用定量PCR法检测体外培养分化到第4天,第8天时DC相关转录因子的表达情况。10.统计学分析采用SPSS 22.0统计软件进行数据统计分析。使用曼-惠特尼U检验临床样本中外周血中树突状细胞及其亚群的比例数量,骨髓中造血干祖细胞细胞比例数量以及H3k79me2的表达水平。使用双侧t检验分析体外分化培养后各组之间细胞数的差异。以及两组之间基因表达情况的差异。使用P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.发生2-4度aGVHD的患者与发生0-1度aGVHD的患者相比其粒细胞植入时DC所占比例以及数量更低,差异有统计学意义。(P<0.05)DC亚群方面发生2-4度aGVHD的患者与发生0-1度aGVHD的患者相比在粒细胞植入时其pDC占总DC的比例以及数量更低,差异有统计学意义。(P<0.05)而CD1c+DC占DC的比例以及数量在0-1aGVHD组和2-4aGVHD组之间无差异。(P>0.05)2.在造血干细胞移植术后1个月时发生2-4度aGVHD的患者与0-1度aGVHD的患者相比其骨髓中总CD34+细胞以及造血祖细胞MPP、CDP的比例以及数量均较少,差异有统计学意义。(P<0.05)3.发生2-4度aGVHD的患者其骨髓中MPP以及CDP表达H3k79me2的表达量较发生0-1度aGVHD的患者的H3k79me2低,差异有统计学意义。(P<0.05)4.MS-5+GFS3组合在体外可以更有效的使造血干细胞分化为DC。5.Dot1L抑制剂SGC0946可以降低造血干细胞体外的增殖,同时可以促使造血干细胞向粒细胞的分化,抑制造血干细胞向pDC分化,差异有统计学意义。(P<0.05)6.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养分化得到的DC与对照组相比可以更强的促进CD4+T细胞向Th1,Th2的分化。7.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养分化得到的DC与未使用抑制剂组相比其共刺激分子HLA-DR,CD86,CD83表达水平更高。8.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养分化得到的DC与对照组相比其细胞因子IL-12,IFN-α,IFN-β的基因表达量均低于对照组。9.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养第四天其IRF4,BATF3,FLT3基因表达量明显低于对照组,差异有统计学意义。(P<0.05)在第8天时TCF4,IRF4,IRF8,FLT3的基因表达量明显低于对照组,差异有统计学意义。(P<0.05)结论:1.GVHD的患者其粒细胞植入时外周血中DC重建受损尤其是pDC。2.GVHD的患者骨髓中的造血干祖细胞MPP/CDP减少与发生2-4严重GVHD反应有明显相关性。而这种现象与造血干祖细胞中Dot1L的表达量低有相关性。3.MS5+GSF3体外分化培养系统与其他细胞因子组合相比可以很好的使造血干细胞向DC分化。4.造血干细胞中Dot1L的甲基化功能受到抑制后会导致DC分化相关的转录因子表达降低,从而影响产生DC尤其是pDC的数量,并且还会利于DC诱导CD4+T的活化,以及共刺激分子的表达。