“三才刺”法对大鼠肾绞痛镇痛作用影响的实验研究

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目的:本课题在中医针灸理论指导下,从“三才刺”法和常规针刺法治疗肾绞痛的镇痛效应比较出发,在动物实验方面研究不同针刺方法对肾绞痛镇痛效应的差异。以大鼠痛阈值的改变,大鼠肾脏及输尿管组织的病理改变,血清、尿中、肾组织中钙(Ca2+)水平的变化,肾组织中PGI2、TXA2、脊髓中前列腺素E2(PGE2)水平的变化为指标,研究不同针刺方法对肾绞痛大鼠的镇痛作用的差异,评价其效应,解决针刺的层次、刺激强度与镇痛效应关系的问题,进而确立取得最佳治疗效应的特异针刺法及其机理并指导临床。材料与方法:将雄性大鼠60只按体重分层随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、常规针刺组(C组)、“三才刺”Ⅰ组(D组)、“三才刺”Ⅱ组(E组),每组12只。本实验自造模前1天测各组大鼠的痛阈值,造模7天后治疗前再次测痛阈值。然后(正式实验开始后第8天)开始治疗。造模过程及治疗前后观察大鼠自发性痛行为改变情况。治疗7天后再次测大鼠痛阈值。以上各组大鼠均在实验结束前1天用代谢笼收集24h尿液。测尿中钙(Ca2+)浓度。常规组(C组)和“三才刺”Ⅰ组(D组)选穴为:“肾俞”;“三才刺”Ⅱ组(E组)选穴为:“阿是穴”。C、D、E组自正式实验开始后第8天上午8:00开始针刺。C组每天电针1次,规律脉冲刺激,每次15min, D组取肾俞穴分“天、人、地”三部刺入(三部按穴位的深度划分:以上1/3为“天”,中1/3为“人”,下1/3为“地”),每部均接电针,每部5min;E组疗法同D组,选穴为阿是穴。每天1次,连续7天。均在实验结束后一天上午8:30分别给每组大鼠腹腔注射20℅乌拉坦麻醉后,经腹主动脉取血5ml,抗凝,测血清钙(Ca2+)水平。摘取双肾、输尿管,左肾用10℅福尔马林液固定,HE染色石蜡切片,光镜下观察肾组织、输尿管病理改变;右肾匀浆后用原子吸收分光光度法测肾组织钙(Ca2+)并用ELASA法测肾组织中PGI2、TXA2水平;取脊髓组织匀浆后用ELASA法测脊髓组织中PGE2的含量。结果:1.痛阈值测定结果造模前大鼠痛阈值:各组大鼠之间比较无差异(p﹥0.05);造模后大鼠痛阈值的变化:B、C、D、E组与A组比较差异显著(p﹤0.01);B、C、D、E四组之间比较无差异(p﹥0.05);治疗后大鼠痛阈值的变化:B组和A组比较有显著性下降,有统计学意义(p﹤0.01),C、D、E组分别与A组比较变化不显著(p﹥0.05);C组和B组比较差异显著(p﹤0.05),D、E组分别和B组比较,差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较,差异显著(p﹤0.05);D、E组之间比较,无统计学意义(p﹥0.05)。2.各组大鼠血清中钙(Ca2+),尿液钙(Ca2+),肾组织中钙(Ca2+)的含量结果和变化血钙(Ca2+):B组和A组比较差异显著(p﹤0.01),C和A组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别与A组比较无差异(p﹥0.05);C组和B组比较有差异(p﹤0.05);D、E组分别和B组比差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E组之间比较无差异(p﹥0.05)。尿钙(Ca2+):B组和A组比较差异显著(p﹤0.01),C和A组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别与A组比较无差异(p﹥0.05);C组和B组比较有差异(p﹤0.05);D、E组分别和B组比差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E组之间比较无差异(p﹥0.05)。肾组织(Ca2+):B组和A组比较差异显著(p﹤0.01),C组和A组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别与A组比较无差异(p﹥0.05);C组和B组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别和B组比较差异显著(p﹤0.01);D组、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E组之间比较无差异(p﹥0.05)。3.各组大鼠肾和脊髓中前列腺素的含量结果和变化肾组织PGI2: B组和A组比较差异显著(p﹤0.01),C组和A组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别与A组比较无差异(p﹥0.05);C组和B组比较有差异(p﹤0.05),D组、E组分别和B组比较差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E组之间比较无差异(p﹥0.05)。肾组织TXA2: B组和A组比较差异显著(p﹤0.01),C组和A组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别与A组比较无差异(p﹥0.05);C组和B组比较有差异(p﹤0.05),D组、E组分别和B组比较差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E组之间比较无差异(p﹥0.05)。脊髓中PGE2: B组和A组比较差异显著(p﹤0.01),C组和A组比较有差异(p﹤0.05),D、E组分别与A组比较无差异(p﹥0.05);C组和B组比较有差异(p﹤0.05),D组、E组分别和B组比较差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E组之间比较无差异(p﹥0.05)。4.各组大鼠肾脏及输尿管的病理改变A组为正常大鼠,肾小球无结晶,无炎细胞,肾间质质地均匀,无炎细胞侵润,无充血,无腔隙扩张,输尿管内壁黏膜光滑,无结晶无坏死脱落组织;B组肾小球内明显充血,有明显炎细胞侵润,肾小管中有晶体分布,肾间质有明显炎细胞侵润,明显充血,腔隙扩张,输尿管内壁黏膜不光滑,有大量坏死脱落组织;C组肾小球内有少量充血,炎细胞侵润减轻,肾间质有少量炎细胞侵润,轻度充血,仍有腔隙扩张,输尿管部分内壁黏膜不光滑,有少量坏死脱落组织;D组肾小球有少量炎细胞侵润,充血明显减轻,肾间质炎细胞侵润明显减轻,充血明显减轻,无腔隙扩张,输尿管内壁黏膜光滑,无坏死脱落组织;E组肾小球内基本无炎细胞侵润,充血明显减轻,肾间质炎细胞侵润明显减轻,充血减轻,有轻微腔隙扩张,输尿管内壁黏膜较光滑,无坏死脱落细胞。5.自发性疼痛行为评分(参照Attal等评分方法)的变化造模后,除空白组外,其余各组大鼠在造模后自发性痛行为频率无差异(p﹥0.05);治疗后,除空白组(A组)外,其余四组大鼠治疗后自发性痛行为频率两两比较,C、D、E组分别和B组比较差异显著(p﹤0.01);D、E组分别和C组比较有差异(p﹤0.05);D、E两组之间比较无差异(p﹥0.05)。结论:1.不同针刺法对大鼠肾绞痛均有疗效。2.“三才刺”法对肾草酸钙结石所致肾绞痛大鼠的镇痛效应优于常规针刺法,具有特异性镇痛效应。3.“三才刺”法的镇痛作用机理是:提高肾草酸钙结石所致肾绞痛大鼠的痛阈值,减少炎性反应和组织水肿,抑制肾组织中PGI2和TXA2、脊髓中PGE2的合成,降低血清钙离子浓度,及尿钙离子,降低肾组织钙离子浓度。4.针刺对肾绞痛的镇痛作用与针刺特异手法关系密切,与选穴可能关系不密切。
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