【摘 要】
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细胞的上皮-间质转化(EMT)是指具有极性的上皮细胞向具有运动能力的间质细胞转化的过程。肿瘤的侵袭和迁移与EMT过程密切相关,是生物分子(如蛋白、核酸等)相互作用的复杂过程
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细胞的上皮-间质转化(EMT)是指具有极性的上皮细胞向具有运动能力的间质细胞转化的过程。肿瘤的侵袭和迁移与EMT过程密切相关,是生物分子(如蛋白、核酸等)相互作用的复杂过程。大量实验研究表明:microRNA (miRNA)在肿瘤细胞的EMT过程中起着十分重要的作用,是当前研究肿瘤的侵袭和迁移机理的热门课题之一。本文针对宫颈肿瘤HeLa细胞的EMT过程,利用生物信息方法,从理论上筛选出HeLa细胞EMT过程中一些起重要作用的miRNA:miR-106a、miR-376a和miR-485-5p;利用分子生物实验方法,研究了miRNA对关键靶基因CDH1的调控作用机理。主要研究工作和成果如下:(1)首先,用生物信息学方法(miRanda、TargetScan、FindTar、PicTar和miRBase),从理论上预测出一批EMT过程中与关键钙黏蛋白靶基因CDH1碱基互补的miRNA分子;从中筛选出miR-106a、miR-376a和miR-485-5p作为研究对象。这些miRNA对靶基因CDH1具有下调作用,即能抑制钙黏蛋白的表达,对HeLa细胞的侵袭转移能力有重要影响。(2)其次,利用分子生物学实验方法,构建了含有1miR-106a、miR-376a、 miR-485-5p和CDH1基因的3’UTR区的质粒;将niRNA质粒和mRNA质粒共转染到HeLa细胞;对细胞进行荧光蛋白表达谱分析检测含有CHD1的3’UTR区的质粒的荧光表达量进行分析。(3)最后,利用分子生物实验数据,分析发现:转染miRNA质粒后,HeLa细胞中CDH1的荧光表达量、钙黏蛋白表达量明显下调,肿瘤细胞的转移能力增强,实验结果与理论预测相符合。本文的理论和实验结果均表明:1miR-106a、miR-376a和miR-485-5p可以调控靶基因CDH1,对肿瘤HeLa细胞的侵袭和转移能力具有促进作用。
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