卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,给患者带来巨大的身体和精神痛苦。目前尚缺乏行之有效的早期诊断、治疗的方法,在各类妇科肿瘤中,因卵巢癌而致死者占据首位。在卵巢恶性肿瘤中以上皮性肿瘤最为多见,约占到60%90%。细胞凋亡与增殖失衡是导致肿瘤恶性行为发生和进展的病理基础,探寻凋亡与增殖相关因子的表达是目前卵巢癌研究中的热点。Livin也称为ML-IAP (Melanoma inhibitor of apoptosis protein即黑色素瘤凋亡蛋白)或KI-AP (Kidney inhibitor of apoptosis protein即肾凋亡蛋白),是新近发现的凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apopotsis protein, IAP)成员之一,在控制细胞凋亡领域发挥举足轻重的作用,它可以通过本身的BIR区与caspase-3,7,9结合并抑制其活性,从而抑制细胞的凋亡。Smac (second mitochondrial activator of caspase,即第二线粒体来源的胱氨酸酶激活剂),也被称为DIABLO (direct IAP binding p rotein with low PI,即低等电点的IAP直接结合蛋白)。它是在2000年才发现的一种可调节细胞凋亡的蛋白质,它存在于线粒体中,其主要作用是去除IAPs对Caspase的抑制作用,从而具有促进细胞凋亡的功能。Livin和Smac之间相互拮抗、相互影响的作用机制是肿瘤凋亡信号转导网络中的重要环节之一Ki-67作为标记细胞增殖状态的抗原,对有丝分裂有至关重要的调控作用,近年来对其研究取得了很大进展,已初步用于衡量和估测肿瘤的生物学行为,还可对判断肿瘤的危害程度有一定的指示作用,被认为是反映细胞增殖活性的理想指标之一。本研究探讨Livin、Smac、Ki-67三者表达变化与卵巢恶性肿瘤发生发展及临床病理因素之间的关系,旨在为卵巢癌的诊断和治疗等研究奠定基础,提供参考。目的本实验采用免疫组化SP法观察凋亡抑制蛋白Livin、凋亡相关因子Smac和细胞增殖核抗原Ki-67在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤以及正常卵巢组织中的表达及差异,并分析Livin、Smac和Ki-67三者的相关性。材料与方法1.实验对象：卵巢标本共110例,取自郑州大学第三附属医院2008年10月-2010年4月收治的患者。研究分为4大组,分别为50例上皮性卵巢癌、20例交界性卵巢肿瘤、20例良性卵巢瘤和20例正常卵巢组织。50例卵巢癌中又根据组织学分类分为浆液性癌20例、黏液性12例、子宫内膜样癌10例、透明细胞癌8例。110名患者术前均未接受过化学药物治疗、放射治疗以及免疫抑制剂治疗等,并且排除了年龄、体重、地域差异以及月经周期等可能会影响实验结果的干扰因素。各标本均经过病理科两位以上医师证实。2.实验方法：本实验采取免疫组化SP法检测凋亡抑制蛋白Livin、凋亡相关因子Smac和细胞增殖核抗原Ki-67在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤以及正常卵巢组织中的表达情况,根据染色强度及阳性细胞占总细胞数的比例进行双评分法半定量积分。测定采用了双盲法,2人独立阅片完成,核对结果,取得共识。3.统计学方法：采用SPSS17.0统计软件进行χ2检验及相关性分析,以a=0.05为差异具有统计学意义。结果1 Livin的表达Livin蛋白主要在胞质表达,偶可见在细胞核表达,显微镜下阳性细胞可呈丝状棕黄色1.1 Livin在不同卵巢组织中的表达Livin在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤以及正常卵巢组织中的阳性表达率分别为：52%、25%、10%、0%。在四种不同的研究对象卵巢组织中的表达差异具有统计学意义(χ2=24.143,P<0.05)；1.2 Livin在不同组织学分级中的表达上皮性卵巢癌组织中,组织学分为G1、G2、G3级,G1级18例、G2级15例、G3级17例。其表达的阳性率为27.8%、53.3%、76.5%；组间差异具有统计学意义(P<0.05)1.3 Livin与有无淋巴结转移组中的表达在有无淋巴结转移组中,发现有淋巴结转移组的免疫组化阳性率为65.4%,无转移组为37.5%,两组间差异具有统计学意义(P<0.05);1.4 Livin在不同临床分期中的表达在50例卵巢癌中,临床Ⅰ期10例、Ⅱ期13例、Ⅲ期14例和Ⅳ期13例。Livin在临床Ⅰ-Ⅱ期和临床Ⅲ-Ⅳ期组织中的表达分别为47.8%和55.6%。表达差异不具有统计学意义(P>0.05)1.5 Livin在不同组织学分类中的表达Livin在浆液性癌、黏液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌中的表达分别为60%、41.7%、50%、50%。不同的组织学分类组间不具有统计学意义(P>0.05)。2 Smac的表达Smac蛋白主要在细胞的胞浆与胞膜着色,细胞核中一般无着色,阳性细胞中呈现棕黄色颗粒。2.1 Smac在不同卵巢组织中的表达Smac在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤以及正常卵巢组织中的阳性表达率分别为：66%、80%、90%、100%。在四种不同的研究对象卵巢组织中的表达差异具有统计学意义(χ2=15.682,P<0.05)2.2 Smac在不同组织学分级中的表达Smac组织学G1、G2、G3级表达的阳性率分别为88.9%、66.7%、41.2%；组间差异具有统计学意义(P<0.05)2.3 Smac在有无淋巴结转移组中的表达在淋巴结是否转移组中,发现有淋巴结转移组的免疫组化阳性率为50%,无转移组为83.3%,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)2.4 Smac在不同临床分期中的表达Smac在临床Ⅰ-Ⅱ期和临床Ⅲ-Ⅳ期组织中的表达分别为69.6%和63.3%。表达差异不具有统计学意义(P>0.05)2.5 Smac在不同组织学分类中的表达Smac在浆液性癌、黏液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌中的表达分别为65%、66.7%、70%、62.5%。不同的组织学分类组间不具有统计学意义(P>0.05)。3 Ki-67的表达Ki-67蛋白主要表达于肿瘤的胞核着色,呈棕黄色颗粒。3.1 Ki-67在不同卵巢组织中的表达Ki-67在上皮性卵巢癌、交界性卵巢肿瘤、良性卵巢肿瘤以及正常卵巢组织中的阳性表达率分别为：72%、45%、30%、0%。在四种不同的研究对象卵巢组织中的表达差异具有统计学意义(z2=32.671,P<0.05)3.2 Ki-67在不同组织学分级中的表达Ki-67在组织学G1、G2、G3级表达的阳性率分别为50%、73.3%、94.1%；组间差异具有统计学意义(P<0.05)3.3 Ki-67在有无淋巴结转移组中的表达在淋巴结是否转移组中,发现有淋巴结转移组的免疫组化阳性率为84.6%,无转移组为58.3%,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)；3.4 Ki-67在不同临床分期中的表达Ki-67在临床Ⅰ-Ⅱ期和临床Ⅲ-Ⅳ期组织中的表达分别为69.6%和74.1%。表达差异不具有统计学意义(P>0.05)3.5 Ki-67在不同组织学分类中的表达Ki-67在浆液性癌、黏液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌中的表达分别为70%、75%、70%、75%。不同的组织学分类组间不具有统计学意义(P>0.05)4 Livin、Smac与Ki-67的相关性在卵巢癌组织中,Livin与Smac的表达呈负相关(r=--0.332,P<0.05)Livin与Ki-67的表达呈正相关(r=0.357,P<0.05),Smac与Ki-67的表达呈负相关(r=-0.293,P<0.05)。结论1 Livin和Ki-67的表达增高和Smac的表达降低可能与卵巢癌的发生发展有关。2 Livin、Smac和Ki-67三者间有一定的相关性,.联合监测Livin、Smac和Ki-67的表达可能有助于卵巢癌的早期诊断。Livin、Smac和Ki-67有望成为未来治疗卵巢癌的新靶点。