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目的：初步探讨新合成的高水溶性二氢杨梅素铵盐(Dihydromyricetin ammonium，ADHM)对饮酒小鼠行为学改变的影响及作用机制。
方法：
1.动物行为学实验：取80只雄性SPF级C57BL/6J小鼠(6～8周龄，体重20±2g)，分为酒精(ethyl alcohol ，EtOH)组，二氢杨梅素组(Dihydromyricetin ， DHM，5 mg/kg)，二氢杨梅素铵盐1组(ADHM1组，5mg/kg)，二氢杨梅素铵盐2组(ADHM2组，10mg/kg)和对照组，对照组不予特殊处理，其余各组进行以下处理：(1)给予56°白酒灌胃，进行急性酒精中毒造模，药物组给予相应处理后，进行翻正反射消失实验(loss of righting reflex，LORR)，观察小鼠醉酒开始时间、醉酒持续时间；(2)给予56°白酒灌胃，进行慢性间歇性酒精暴露模型(chronic intermittent ethanol exposure，CIE)造模，戒断24小时后，给予相应药物处理：①进行高架十字迷宫实验(the elevated plus-maze test，EPM)，观察5min内小鼠进入开放臂、闭合臂的停留时间，并计算开放臂、闭合臂停留时间占总时间百分比；②将EtOH组、ADHM1组和对照组小鼠戒断24小时后，给予56°白酒灌胃，进行酒精耐受实验，依次记录为为CIE/E组、ADHM1/E组和Control/E组，观察醉酒开始时间、醉酒持续时间。(3)给予28°白酒自由饮用，行间歇性自愿饮酒模式造模，给予相应药物处理后，进行双瓶选择实验(two-bottle choice intermittent access to EtOH paradigm，TBC)，记录每组小鼠每天每千克体重消耗的EtOH量和饮水量(g/kg·day)及液体摄入偏好。
2.体外实验：取新生Sprague-Dawley大鼠5只，分离原代海马神经元，培养至10-14天时，(1 )使用神经元胞体和树突中广泛表达的微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2，MAP2)抗体染色，进行免疫荧光鉴定；(2)利用激光共聚焦显微镜观察加载了新型氯离子荧光探针(MQAE)后的海马神经元，并使用ZEISSZEN显微成像软件测定荧光值，计算最大可淬灭荧光F0及Cl?增加后荧光的变化值FCl，根据Stern-Volmer方程：F0/FCl=1+KSV[Cl?]，计算淬灭常数KSV，并绘制新型氯离子荧光探针(MQAE)淬灭标准曲线；(3)①将加载MQAE后的海马神经元分为EtOH组(60mM)、A10组(ADHM10μM)、A100组(ADHM100μM)、EtOH+A10组、EtOH+A100组，进行对应药物处理后测定荧光值得出F0、FCl，根据标准方程计算进入细胞内的Cl?浓度([Cl?]i)，以明确ADHM对EtOH诱导的Cl?内流的影响；②将加载MQAE后的海马神经元分为EtOH组、荷包牡丹碱(Bicuculline，Bic)组、氟马西尼(Flumazenil， Flu)组、EtOH+Bic组、EtOH+A100+Bic组、A100+Bic组、EtOH+A100+Flu组、A100+Flu组，进行对应药物处理后测定荧光值得出F0、FCl，根据标准方程计算进入细胞内的Cl?浓度([Cl?]i)，以明确ADHM在GABAAR上的作用位点；(4)加载MQAE后，加入不同浓度的GABA(1uM、3 uM、10 uM 、30 uM 、100 uM 、300 uM)激活GABAAR，测定荧光值计算得出Ft、FCl，绘制海马神经元GABA浓度-效应曲线，加入20uMADHM(终浓度10uM)后绘制曲线，以明确ADHM对GABA浓度-效应曲线的影响。
结果：
1.动物行为学实验：
LORRTest：与EtOH组相比，ADHM1组，ADHM2组，DHM组小鼠醉酒持续时间明显缩短(p<0.0001)。ADHM1组、ADHM2组与DHM组相比无统计学差异。
EPM：与EtOH组对比，ADHM2组小鼠进入开放臂的时间明显延长(p＜0.001)，闭合臂进入时间缩短(p＜0.0001)，ADHM1组、DHM组小鼠进入闭合臂的时间缩短(p＜0.001)。ADHM2组与DHM组相比，开放臂、闭合臂进入时间均无统计学差异。ADHM1组、ADHM2组、DHM组小鼠进入闭合臂时间均无统计学差异。
酒精耐受实验：与Control/E组相比，CIE/E组小鼠对酒精的耐受性明显增加(p<0.0001)。ADHM/E组与Control/E组相比，醉酒持续时间无明显差异。
TBC：在实验第7周末，与EtOH组相比，ADHM1组、ADHM2组、DHM组小鼠每天每公斤体重酒精消耗量均较少(p＜0.0001)，但此三组之间无统计学意义。第1周末与第7周末相比，EtOH组小鼠对酒精的偏好明显增加(p＜0.05)，ADHM1组小鼠对酒精的偏好略增加，但无统计学意义。
2.体外实验
(1)免疫荧光鉴定：海马神经元体外培养至第10天后，神经元胞体饱满，神经纤维网络密集，荧光显微镜下，可见微管相关蛋白2(MAP2)在海马神经元细胞体和树突中表达，神经元细胞阳性率为95%以上。
(2)MQAE荧光淬灭标准曲线：根据实验结果，得到标准方程为：y=0.078x+1.0987，R2=0.9931(y=F0/FCl,x=[Cl?])。
(3)与Control组相比，EtOH组发生了Cl?内流(p＜0.0001)。EtOH+A10组、EtOH+A100组可抵消EtOH引起的Cl?内流(p<0.0001)。单独加入ADHM10μM/100μM后，与对照组相比，无统计学差异。EtOH+A100+Flu组发生了Cl?内流，与EtOH组对比不具有统计学意义，EtOH+Bic组、EtOH+A100+Bic组、A100+Bic组、A100+Flu组、Flu组、Bic组未发生大量的Cl?内流(p<0.0001)。A100+Bic组与Flu组、Bic组之间无统计学差异。A100+Flu组与Flu组之间亦无统计学差异。
(4)随着GABA浓度的增加，Cl?内流的量的随之增大。但加入20uMADHM(终浓度10uM)低氯缓冲液后，发现GABA浓度-效应曲线向左移动。
结论：
1.动物研究发现，同DHM一样，ADHM具有解酒、促醒作用，可缓解酒精戒断后引起的焦虑，防止产生酒精耐受及酒精依赖。
2.ADHM作用于GABAAR的苯二氮卓位点，可同时作用于突触及突触外GABAAR，终止酒精激活GABAAR导致的Cl?内流。
方法：
1.动物行为学实验：取80只雄性SPF级C57BL/6J小鼠(6～8周龄，体重20±2g)，分为酒精(ethyl alcohol ，EtOH)组，二氢杨梅素组(Dihydromyricetin ， DHM，5 mg/kg)，二氢杨梅素铵盐1组(ADHM1组，5mg/kg)，二氢杨梅素铵盐2组(ADHM2组，10mg/kg)和对照组，对照组不予特殊处理，其余各组进行以下处理：(1)给予56°白酒灌胃，进行急性酒精中毒造模，药物组给予相应处理后，进行翻正反射消失实验(loss of righting reflex，LORR)，观察小鼠醉酒开始时间、醉酒持续时间；(2)给予56°白酒灌胃，进行慢性间歇性酒精暴露模型(chronic intermittent ethanol exposure，CIE)造模，戒断24小时后，给予相应药物处理：①进行高架十字迷宫实验(the elevated plus-maze test，EPM)，观察5min内小鼠进入开放臂、闭合臂的停留时间，并计算开放臂、闭合臂停留时间占总时间百分比；②将EtOH组、ADHM1组和对照组小鼠戒断24小时后，给予56°白酒灌胃，进行酒精耐受实验，依次记录为为CIE/E组、ADHM1/E组和Control/E组，观察醉酒开始时间、醉酒持续时间。(3)给予28°白酒自由饮用，行间歇性自愿饮酒模式造模，给予相应药物处理后，进行双瓶选择实验(two-bottle choice intermittent access to EtOH paradigm，TBC)，记录每组小鼠每天每千克体重消耗的EtOH量和饮水量(g/kg·day)及液体摄入偏好。
2.体外实验：取新生Sprague-Dawley大鼠5只，分离原代海马神经元，培养至10-14天时，(1 )使用神经元胞体和树突中广泛表达的微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2，MAP2)抗体染色，进行免疫荧光鉴定；(2)利用激光共聚焦显微镜观察加载了新型氯离子荧光探针(MQAE)后的海马神经元，并使用ZEISSZEN显微成像软件测定荧光值，计算最大可淬灭荧光F0及Cl?增加后荧光的变化值FCl，根据Stern-Volmer方程：F0/FCl=1+KSV[Cl?]，计算淬灭常数KSV，并绘制新型氯离子荧光探针(MQAE)淬灭标准曲线；(3)①将加载MQAE后的海马神经元分为EtOH组(60mM)、A10组(ADHM10μM)、A100组(ADHM100μM)、EtOH+A10组、EtOH+A100组，进行对应药物处理后测定荧光值得出F0、FCl，根据标准方程计算进入细胞内的Cl?浓度([Cl?]i)，以明确ADHM对EtOH诱导的Cl?内流的影响；②将加载MQAE后的海马神经元分为EtOH组、荷包牡丹碱(Bicuculline，Bic)组、氟马西尼(Flumazenil， Flu)组、EtOH+Bic组、EtOH+A100+Bic组、A100+Bic组、EtOH+A100+Flu组、A100+Flu组，进行对应药物处理后测定荧光值得出F0、FCl，根据标准方程计算进入细胞内的Cl?浓度([Cl?]i)，以明确ADHM在GABAAR上的作用位点；(4)加载MQAE后，加入不同浓度的GABA(1uM、3 uM、10 uM 、30 uM 、100 uM 、300 uM)激活GABAAR，测定荧光值计算得出Ft、FCl，绘制海马神经元GABA浓度-效应曲线，加入20uMADHM(终浓度10uM)后绘制曲线，以明确ADHM对GABA浓度-效应曲线的影响。
结果：
1.动物行为学实验：
LORRTest：与EtOH组相比，ADHM1组，ADHM2组，DHM组小鼠醉酒持续时间明显缩短(p<0.0001)。ADHM1组、ADHM2组与DHM组相比无统计学差异。
EPM：与EtOH组对比，ADHM2组小鼠进入开放臂的时间明显延长(p＜0.001)，闭合臂进入时间缩短(p＜0.0001)，ADHM1组、DHM组小鼠进入闭合臂的时间缩短(p＜0.001)。ADHM2组与DHM组相比，开放臂、闭合臂进入时间均无统计学差异。ADHM1组、ADHM2组、DHM组小鼠进入闭合臂时间均无统计学差异。
酒精耐受实验：与Control/E组相比，CIE/E组小鼠对酒精的耐受性明显增加(p<0.0001)。ADHM/E组与Control/E组相比，醉酒持续时间无明显差异。
TBC：在实验第7周末，与EtOH组相比，ADHM1组、ADHM2组、DHM组小鼠每天每公斤体重酒精消耗量均较少(p＜0.0001)，但此三组之间无统计学意义。第1周末与第7周末相比，EtOH组小鼠对酒精的偏好明显增加(p＜0.05)，ADHM1组小鼠对酒精的偏好略增加，但无统计学意义。
2.体外实验
(1)免疫荧光鉴定：海马神经元体外培养至第10天后，神经元胞体饱满，神经纤维网络密集，荧光显微镜下，可见微管相关蛋白2(MAP2)在海马神经元细胞体和树突中表达，神经元细胞阳性率为95%以上。
(2)MQAE荧光淬灭标准曲线：根据实验结果，得到标准方程为：y=0.078x+1.0987，R2=0.9931(y=F0/FCl,x=[Cl?])。
(3)与Control组相比，EtOH组发生了Cl?内流(p＜0.0001)。EtOH+A10组、EtOH+A100组可抵消EtOH引起的Cl?内流(p<0.0001)。单独加入ADHM10μM/100μM后，与对照组相比，无统计学差异。EtOH+A100+Flu组发生了Cl?内流，与EtOH组对比不具有统计学意义，EtOH+Bic组、EtOH+A100+Bic组、A100+Bic组、A100+Flu组、Flu组、Bic组未发生大量的Cl?内流(p<0.0001)。A100+Bic组与Flu组、Bic组之间无统计学差异。A100+Flu组与Flu组之间亦无统计学差异。
(4)随着GABA浓度的增加，Cl?内流的量的随之增大。但加入20uMADHM(终浓度10uM)低氯缓冲液后，发现GABA浓度-效应曲线向左移动。
结论：
1.动物研究发现，同DHM一样，ADHM具有解酒、促醒作用，可缓解酒精戒断后引起的焦虑，防止产生酒精耐受及酒精依赖。
2.ADHM作用于GABAAR的苯二氮卓位点，可同时作用于突触及突触外GABAAR，终止酒精激活GABAAR导致的Cl?内流。