香蕉解旋酶基因的克隆和反义转化番茄的研究

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangaimin143074
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1.香蕉解旋酶基因的克隆和Southern杂交分析: 本研究利用抑制差减杂交(Suppression Subtractive Hybridizations SSH)技术筛选香蕉不同成熟度条件下得到的差异表达的目标基因片段,利用梯度PCR技术在香蕉果实cDNA文库中扩增到目标基因5′端长800bp左右的片断,经回收,克隆,测序,证明确实克隆到了目标基因的5′端,大小为805bp.与已知的目标基因序列拼接,得到目标基因1473bp cDNA序列。用NCBI-Blast对该基因cDNA片段核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性检索,结果表明;目标基因属于解旋酶(Helicase)基因家族。通过与香蕉基因组进行Southern杂交分析表明:证实此解旋酶基因来自香蕉,在香蕉基因组中只有一个拷贝,为低拷贝基因。 2.香蕉解旋酶基因反义转化番茄的研究: 通过构建香蕉解旋酶基因的反义基因植物表达载体,利用农杆菌介导法,转化番茄子叶,经卡那霉素(Kan)多重筛选,共获得了20株抗性植株。选取7株表型发生变异的番茄抗性植株进行Southern杂交检测,证明其中5株是转基因植株,另2株可能是组织培养过程中发生的变异。获得的5株转反义基因的番茄植株,表型跟对照相比发生了较大的形态变异和病理形态,这和我们预测的植物解旋酶基因可能和植物的某些疾病相关一致。通过对这些转基因植株表型的遗传分析,对鉴定解旋酶基因功能奠定了基础。
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